10Sa RNA is one of small stable RNAs in Escherichia coli. About 1000 copies of 10Sa RNA are present per haploid cell. A 10Sa RNA precursor is processed to generate the mature form. E. coli mutants that fail to synthesize 10Sa RNA are viable with the only observable phenotypic alterations being slower growth and slow recovery from carbon starvation. Roles of 10Sa RNA is not precisely understood. It has been known that C5 protein, the protein component of RNase P, affects synthesis of M1 RNA (10Sb RNA), the RNA component of RNase P, which is also one of small stable RNAs. Since regulation of synthesis of stable RNAs is closely linked, we examined the effects of C5 protein on 10Sa RNA synthesis in E. coli. Amounts of 10Sa RNA in cells producing a high level of C5 protein upon induction with IPTG were analyzed by Northern hybridization. The ssrA gene encoding 10Sa RNA was cloned by PCR amplification from E. coli chromosomal DNA. Antisense 10Sa RNA was synthesized by in vitro transcription and used as a probe for Northern hybridization. The amount of 10Sa precursor increased and the mature 10Sa RNA decreased as the intracellular concentration of C5 protein increased upon induction with IPTG The results suggest that the overproduction of C5 protein increases transcription of 10Sa RNA and promotes the degradation of mature 10Sa RNA.
10Sa RNA는 대장균 내에서 존재하는 작고 안정한 RNA 중에 하나이다. 세포당 약 1000개가 존재한다. 10Sa RNA는 그 유전자인 ssrA 유전자로부터 처음 생기는 전사체인 전구체가 가공되어서 성숙된 형태를 이루게된다. 10Sa RNA의 기능은 잘 알려져 있지 않으나 세포의 성장에 관여하는 것으로 알려져 있다. RNase P의 단백질 성분인 C5 protein은 RNase P의 RNA 성분인 M1 RNA의 전사에 영향을 끼치는 것으로 알려져있다. 작고 안정한 RNA의 조절작용은 서로 관련이 있으므로 10Sa RNA는 M1 RNA와 마찬가지로 C5 protein에 의해서 그 발현이 조절될 수 있다. C5 protein 이 10Sa RNA의 발현에 미치는 영향을 조사하기 위하여 Northern hybridization을 이용하였다. ssrA 유전자를 대장균의 염색체 DNA로부터 PCR에 의해 증폭되어 클로닝하였다. 이 유전자로부터 시험관내 전사법에 의해 합성되어진 antisense 10Sa RNA를 Northern Hybridization의 탐침으로 이용하였다. 대장균 내에서 IPTG에 의해 유도되어 C5 protein을 과잉생산하는 플라스미드 pSSC5를 이용하여 C5 protein의 농도를 변화시켰을 때 10Sa RNA의 전구체의 양이 증가하고 반면에 성숙된 10Sa RNA의 양은 감소하였다. 이 결과로부터 높은 농도의 C5 protein은 ssrA 유전자의 전사량을 증가시키고 성숙된 10Sa RNA의 분해를 촉진시킴을 알 수 있었다.
