From a potential acetyl-CoA synthetase gene (acs) predicted from E. coli genome sequencing, we created an insertion mutation of acs on the chromosme. The acs mutant has a deficiency in utilizing acetate especially at low concentration, although the strain still metabolizes acetate via Pta/AckA pathway. When monitored by cat fusion to the acs promoter, the repression by glucose was observed while the removal of negative regulators for glyoxylate bypass, iclR and fadR, did not affect the expression of acs. It was also found that the FruR, a global regulator, acts as a positive regulator for the acs gene.
대장균의 genome project과정에서 알려진 효모와 곰팡이의 acetyl-CoA synthetase (acs) 유전자와 염기 서열상 유사성을 가진, 대장균 염색체의 92분 위치에 존재하는 잠재적인 acs유전자를 subclonimg 하여, reverse genetics 의 방법을 이용하여, 대장균 염색체상의 acs 돌연변이를 만들었다. 이 acs 돌연변이주는 acetate를 유일 탄소원으로 자랄때, 비록 Pta/AckA경로를 통한 acetate의 activation은 일어나지만, 아주낮은 농도의 acetate를 이용하는 데 있어서 결함을 보였다. 또한, monofluoroacetae에 대하여서는 pta나 ackA 돌연변이주와는 달리 내성을 지니지 못하였다. acs promoter부분에 CAT유전자를 붙여 그 발현의 정도를 보았을때, 포도당에 의한 catabolite repression 현상을 보였으며, ace operon의 repressor로 작용하는 IclR과 FadR은 acs유전자 발현에 영향을 미치지 않았으나, 최근 global regulator로 알려진 FruR이 acs유전자 발현에 positive activator로 작용함을 밝혔다.
