Previously known antifungal protein, tenecin 3, secreted by larvae of Tenebrio molitor was isolated and its N-terminal 25 amino aci sequences were determined. In order to isolate cDNA clones of tenecin 3, mRNA was prepared from larvae of Tenebrio molitor an cDNA libraries were constructed using $\lambda$gt11 as a cloning vector. PCR experiments were carried out to screen the cDNA libraries. PCR primers were designed by deducing nucleotides from the N-terminal amino acid sequences and modifying a $\lambda$gt11 sequencing primer. The PCR-amplified DNA fragments with appropriate combination of the primers on the cDNA libraries as templates were cloned and their identity as cDNAs corresponding to tenecin 3 was confirmed by DNA sequencing. Arrangement of the DNA sequences of overlapping cDNAs relative to one another identified 326 nucleotides for mRNA encoding tenecins 3. The analysis of the nucleotide suquences indicates that tenecin 3 is composed of 78 amino acids and synthesized as a prepeptide which is matured by cleavage of a signal peptide. Tenecin 3 is rich in glycine (44%) and has a characteristic tetrapeptide unit which is 14 times repeated.
항진균 단백질은 항미생물질 단백질의 일종으로써, 식물에서는 chitinase, glucanase, ribosome-inactivating 단백질등이 알려져 있으나, 곤충에서의 항진균 단백질은 거의 알려져 있지 않다. 따라서, 곤충의 항진균 단백질을 연구하기위한 기초연구로써, 여기서는 Tenebrio molitor에 서 이미 분리정제된 tenecin 3라는 항진균 단백질의 cDNA를 검출하고자 하였다. 먼저, 이미 알려진 25개의 아미노산 배열순서를 가지고 primer들을 고안하였으며, 이것과 vector의 sequencing primer의 적절한 조합을 통하여 PCR을 수행하였다. PCR은 크게 3 부분으로 나누어서 실행하였으며, 각각의 목적은 mature 단백질의 클로닝, signal sequence를 포함하는 5'부분의 클로닝, untranslated region을 포함하는 3'부분의 클로닝이었다. PCR을 이용하여 클로닝된 Tenecin 3 cDNA는 다른 어떤 염기서열과도 상동성이 없었으며, 이 cDNA를 해독하였을때의 아미노산 배열순서도 역시 상동성이 없었다. cDNA로부터 해독된 단백질은 78개의 mature protein의 아미노산을 코딩하였으며, 이 단백질의 분자량은 해독된 아미노산 서열을 기준으로하여볼때, 7.4 kDa이었다. 이 단백질은 glycine이 풍부하였으며, 특징적인 tetrapeptide 반복단위를 가진다.
