As a first step toward understanding regulation of the phosphatidylinositol - specific phospholipase C(PLC) isoform genes, the 5' flanking region of the Rat PLC-$\beta$3 gene was sequenced and characterized. Sequence analysis of the 5' flanking region revealed that it contains a CCAAT sequence at position -289 and a extremely high GC- rich region(-305 to -16bp: 78\%). But, TATA box was not found in this region. This 5' region also contained binding sites for the transcription factors Sp1, AP-1, AP-2, and PEA3. When the putative promoter was ligated into a promoterless CAT vector and transfected into C$_6$Bu1 cells, CAT activity was expressed, indicating the promoter region was located in this fragment. To define sequences that influence transcription of the PLC-$\beta$3 gene, transcription activities of various 5' deletion mutants of its upstream region, fused to the CAT gene, were examined in terms of CAT expression after transfection into C$_6$Bu1 cells. Deletion mutational analysis revealed that the PLC-$\beta$3 promoter contains at least three positive elements; -1827 to -1543 bp, -1232 to -1072 bp, and -587 to -489 bp. In addition to these positive elements, there are two negative elements; -1543 to -1393 bp and -643 to -587 bp. Gel mobility shift assays revealed that these elements form multiple protein- DNA complexes with nuclear proteins in C$_6$Bu1 cells. These results suggest the presence of multiple trans - acting factors that act on these positive and negative cis - acting elements and regulate the transcription of the PLC-$\beta$3 gene.
포스포 라이페이즈 C(PLC) isform 유전자들의 조절을 이해 하기 위하여 먼저 쥐 포스포 라이페이즈 C 베타 3 유전자의 5'말단 부위에 대한 염기서열분석과 그 전사개시부위의 활성을 조사하였다. 5'말단 부위에는 GC 양이 많은 부위가 존재하였고 -289부위에 CCAAT 염기서열이 있으나 TATA box는 존재하지 않았다. 또한 이 말단 부위는 Sp1, AP-1, AP-2 그리고 PEA3 같은 전사인자가 붙을 수 있는 곳도 존재하였다. 이 5' 말단부위를 전사개시 부위가 없는 CAT vector에 붙인 후 $C_6Bu1$ 세포에 넣었을 때 CAT 유전자 발현이 되는 것으로 보아 이 부위는 전사 개시 활성을 가짐을 알수 있었다. 포스포 라이페이즈 C 베타 3 유전자의 전사에 영향을 미치는 염기 서열을 알아보기 위해 5' 말단부위에 대한 여러 5'절단 돌연변이들의 CAT발현을 비교한 결과 PLC 베타3의 전사 개시 부위는 최소한 세개의 positive element을 가지고 있었다(-1827부터 -1543까지, -1232 부터 -1072까지 그리고 -587부터 -489까지). 또한, 두개의 negative element가 존재하였다. (-1543부터 -1398까지 그리고 -1232부터 -1072까지). Gel mobility shift 실험 결과 이들 element들은 $C_6Bu1$ 세포내의 여러 핵 단백질과 결합함을 알수 있었다. 이런 결과는 포스포 라이페이즈 C 베타 3 유전자의 전사를 조절하는 여러 cis-acting element에 작용할수 있는 많은 trans-acting 인자의 존재를 예상할수 있다.
