It has been known that DNA polymerase α plays a major role in DNA replication of eukaryotes, moreover has function of repairing damaged DNA. To purify DNA polymerase α, two different protocols were used;First was conventional chromatographic method that has been generally used for protein purification, Second was immunoaffinity chromatography using monoclonal antibody which specifically binds to human DNA polymerase α. Of purified DNA polymerase α subunits, >190kDa protein was degraded by protease. Its activity was reduced by aphidicolin, specific DNA polymerase α inhibitor, but not by dideoxythymidine triphosphate which is an inhibitor of other DNA polymerases.
DNA polymerase α activity in cell was changed during the progression of cell cycle. Enzyme activity was increased slightly before DNA replication(S phase). When NIH3T3 cells were irradiated by UV light to damage chromosomal DNA, DNA polymerase α activity was increased in nuclear fraction. When cell were treated with PMA(Phorbol myristate acetate), protein kinase C activator and modulator of cell division and differentiation, DNA polymerase α activity increased in cytoplasmic and nuclear fractions. DNA polymerase α is involved in DNA repair and DNA replication, and the increment of enzyme activity is a result of posttrannnslational modification. This implicates that DNA polymerase α activity might be controlled by protein kinase C in vivo.
DNA 중합효소 α는 진핵세포 분열시 DNA 복제를 담당하는 주요 단백질이며, 복제적 DNA 합성이외에도 손상을 입은 DNA를 복구하는 기능도 갖고 있는 것으로 알려져 왔다. 진핵세포 DNA 중합효소 α를 분리하기위해 두가지 방법을 사용하였는데, 첫번째는 일반적으로 단백질 분리에 이용하는 크로마토그래피 방법이고, 두번째는 인체 DNA 중합효소 α에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 immunoaffinity 크로마토그래피 방법이다. 첫번째 방법으로 분리된 DNA 중합효소 α는 immunoaffinity 방법에 의해 분리된 같은 단백질에 비해 >190kDa 단백질이 protease에 의해 분해된 형태로 많은 양 존재하였고, DNA 중합효소 α의 특정 저해제인 aphidicolin에 의해서 활성도가 감소하였지만, 다른 DNA 중합효소의 억제제인 ddTTP에 의해서는 억제되지 않았다. 세포주기에 따른 DNA 중합효소 α의 활성도를 조사한 결과 DNA 복제시기 직전에 효소의 활성도가 증가함을 알수 있었고, DNA에 손상을 주기위해 $G_o$시기의 NIH3T3 세포에 UV를 조사하였을 때, 세포내의 DNA 중합효소 α는 세포핵내에서 그 활성도가 증가함을 알 수 있었다. 세포에 PKC의 activator이며, 세포의 분화 성장 촉진제인 PMA를 처리하였을때에는 세포질내의 DNA 중합효소 α의 활성도가 증가하였는데, 이것은 PKC에 의한 인산화에 의해 DNA 중합효소 α의 활성도가 in vivo에서 조절될지도 모른다는 가능성을 제시하고 있다.
이러한 사실은 DNA 복구에 DNA 중합효소 α가 관여하며 효소의 활성도 증가가 translation 이후의 변화에 의한 결과임을 암시한다.
