The nucleotide sequences of the cloned Clostridium botulinum type B neurotoxin (BoNT/B) gene fragments were analyzed by dideoxy chain termination methods. The 2.5 Kb fragment coded for the C- terminus of L chain and H chain fragment. The nucleotide sequence for the BoNT/B fragment was determined, and derived amino acids sequence compared with those of botulinum neurotoxin type A (BoNT/A) and tetanus toxin (TeTx). It was found that there exist highly homologous regions and specially extremely conserved trp amino acid. 2.4 Kb HindIII fragment (containing N-terminus of H chain) and 1.9 Kb Xbal fragmant (containing not) were expressed in E. coli with pRSET, a plasmid vector containing the T7 promoter and a portion of the mbs gene. The fusion protein containing N-terminus of H chain were shown to react with, anti-BoNT/B monoclonal antibody BTBM4 recognizing H chain. This result suggests that the epitope of BTBM4 is located in N-terminus of H chain.
Dideoxy chain termination method 를 이용하여 Clostridium botulinum type B 신경독소 유전자의 염기서열을 분석하였다. 2.5 Kb 유전자 조각에는 L chain 의 C- 말단과 H chain 에 해당되는 유전자로 구성되어 있었다. 위 유전자 조각의 염기서열이 결정되고 이에 아미노산 서열이 추정되어 botulinum type A 신경독소 및 tetanus 독소와 비교하였다. 위 세 독소의 아미노산 서열 사이에는 높은 유사성을 가지는 부위가 존재하며, 특히 트립토판 잔기가 진화학적으로 강력하게 보존되어 있음을 알 수 있었다. T7 프로모터와 mbs 유전자를 가지는 플라스미드 벡터인 pRSET 를 이용하여 H chain 의 N- 말단이 존재하는 2.4 Kb Hind III 절편과 존재하지 않는 1.9 Kb Xba I 절편을 대장균 내에서 발현 시켰다. H chain 을 인지하는 단일클론 항체인 BTBM4 로 Western blotting 을 수행한 결과 H chiain 의 N- 말단을 함유하는 융합 단백질만이 인식되는 것으로 보아 BTBM4 의 항원 결정부위는 H chain 의 N- 말단에 위치함을 알 수 있었다.
