To clone the alkaline protease gene from alkalophilic $\underline{Bacillus}$ in E. coli JM107, we prepared a subgenomic library of chromosomal DNA. The chromosomal DNA was digested with EcoRI and fractionated by electrophoresis in a 0.8% agarose gel, the fragments were joined with the linearized pUC18 vector. The recombinant plasmid was used to transform E. coli JM 107. About 6000 transformants were tooth-picked on LBMG plate, and one colony formed clear zone. The recombinant plasmid was named pAL 37 and the insert size was 1.85Kb. And then optimum pH of the alkaline protease was 12. From restriction enzyme mapping, it was found that the insert has AvaII(2), Bgl II(1), EcoRI(1) KpnI(1), NdeI(1) sites.
호 알칼리성 $\underline{Bacillus}$ 균주에서 chromomal DNA를 분리하고 제한효소 EcoRI 으로 절단하여 크기별로 5개의 fraction으로 분리한후 이들 각각을 EcoRI 과 CIP로 처리된 운반체 pUC18과 연결시켜 재조합 DNA를 만들어서 E. coli JM107에 형질전환시켰다. 형질전환된 대장균을 LBMG plate에 tooth-picking 하여 투명한 zone을 형성하는 하나의 colony를 선별하였다. 이 형질전환 균주로부터 재조합 plasmid를 분리하여 insert 크기를 확인한 결과 1.85 Kb 의 EcoRI 염색체 절편이 존재함을 알 수 있었으며 이 재조합 plasmid 를 pAL37 로 명명하였다. pAL37을 갖는 recombinant E. coli 가 분비하는 alkaline protease 의 최적 pH 는 12 이며 제한효소를 이용하여 DNA 단편의 유전자지도를 작성한바 AvaII (2), BglII(1), EcoRI(1), KpnI(1), NdeI(1)의 제한효소 자리를 갖고 있었다.
