The immunosuppressive effects, genotoxic effects, and consequent metabolisms of aflatoxin B1 (AFB1) were investigated under the culture of mouse splenocytes (SPLC) either alone or cocultured with at hepatocytes (HPTC). In attempt to elucidate the immunosuppressive effects with Balb/C mouse (Ah locus responsiveness), Polyclonal antibody response to LPS that used antibody forming cell (AFC) assay resulted in the suppression with dose-dependent fashion ($10^{-7}-10^{-4}$ M) at two system of cultures. And mitogen induced proliferative response to LPS and concanavaling A (ConA) that due to the proportion of incorporation of $^3H$-thymidine, were the similar pattern as above. Different strains, C57BL/6, C3H (Ah locus responsiveness), DBA/2 (Ah locus nonresponsiveness), showed the dose-related immunosuppression like Balb/C. Direct addition of AFB1 revealed the time-dependent suppression according to the period of pretreatment, and also the more suppression of antibody forming cells was obtained, which demonstrated an early requirement for AFB1 in culture in order to induce significant suppression. To assess the genotoxic effect against the DNA repairing and the single-strand breaks (SSBs), unscheduled DNA synthesis (UDS) assay and alkaline elution analysis were used respectively. In these studies with the cultured splenocytes, not only were significant levels of UDS measured in a time-dependent manner, but were DNA elution profile of SSBs induced detected with a same pattern. And, to examine the consequent metabolism under the culture of spleen cells alone, HPLC analysis was performed that showed the amount of aflatoxicol increased during the exposuring time designated. In summary, these studies indicated that a consequent metabolite following cultures of splenocytes were affected to the immunosuppressive and genotoxic effect. But what kinds of species of metabolite influenced was unknown.
본 논문은 Mycotoxin의 하나인 Aflatoxin Bl(AFBl)의 면역 억제 작용에 대한 것이다. 실험의 주 목적은 비장세포를 단독 배양할 때도 면역 억제 작용을 나타내며, 이는 비장세포가 대사 능력이 있기 때문임을 보이기 위한 것이다.
AFBl은 비장 세포 단독 배양시 직접 첨가하면 그 자체로 면역 억제 효과를 보였다. 이는 4종류의 mouse에 대하여 같은 경향을 나타냈다. 또 비장 세포와 일차 배양 간세포를 공동 배양했을 경우에도 면역 억제 효과를 나타냈으며 역시 4종류의 mouse에 대하여 같은 경향을 보였다. 이는 그 억제 효과가 비장 세포 배양 시간이 길어짐에 따라 AFBl의 대사에 의하여, 활성 대사 물질의 증가에 의한 것으로 관찰되었다.
한편, 비장 세포 단독 배양에 대하여 UDS가 증가함을 보여 주었으며 alkaline elution시에도 효과가 나타났으므로, 비장 세포에 의한 대사가 면역 억제 효과에 중요함을 알 수 있었다.
HPLC 결과 역시 AFBl의 대사체에 대한 peak를 보여 주었으며, 특히 Aflatoxicol의 양은 배양 시간에 비례하여 증가함을 보였다.
이로서 비장 세포 단독 배양으로 AFBl이 대사되었으며 이에 의한 대사체가 면역 억제 효과를 나타낸다고 제안하였다.
