Factors affecting hybridoma cell growth and specific monoclonal antibody (Mab) production rate was studied. Hybridoma Alps 25-3 was mouse-mouse hybridoma produced by somatic cell hybridization between myeloma sp 2/0 and spleen cell of Balb/c, and secreted IgGl against human Chorionic Gonadotropin (hCG) β subunit.
Reactor operation using bioreactor showed that specific growth rate, specific glucose consumption rate and specific ammonium ion production rate were nearly costant during 20-60hr culture time. But only specific monoclonal antibody production rate was reduced in that period. These results suggested that secretion of Mab was inhibited by some factors and the factor might be Mab itself which had been secreted.
When purified Mab from spent medium was added to cell culture broth, ELISA results showed inhibition upon secretion of Mab but SRID results didn't show any inhibition Because SRID results were more accurate and reliable, it was true that secreted Mab did not inhibit secretion of Mab.
Toxic effect of ammonium ion on cell growth was shown at concentration of 7-10 mM $NH_3-N$, not at 3-4mM that produced in batch culture. Therefore, ammonium ion was not major factor affecting cell density regulation.
When spent medium was added to cell broth by 30%, cell growth was not affected.
하이브리도마 세포 증식과 단일클론항체 비생성속도에 영향을 미치는 요인들에 대하여 연구하였다.
하이브리도마 Alps 25-3 는 myeloma sp 2/0 와 Balb/c의 spleen cell 사이의 체세포융합에 의해 만들어진 잡종세포로서 인체융모성 성선 자극호르몬 (human Choridnic Gonadotropin) 의 β subunit에 대한 단일클론항체 IgG1을 분비한다.
반응기를 이용하여 배양했을 때 세포 비성장속도와 포도당 비소모속도 그리고 암모니아 비생성속도는 배양 시작 후 20시간부터 40시간 동안 거의 일정했다. 그러나 단일클론항체 비생성속도만은 그 기간동안 감소함을 보였다. 이 결과로 부터 단일클론항체의 분비는 어떤 요인에 의해 저해받고 있으며 분비된 항체가 그 요인으로 생각되었다.
Spent medium에서 분리된 단일클론항체를 배양액에 첨가했을 때 Enzyme linked immunosorbant assay (ELISA) 결과는 feed back inhibition 이 있음을 보이나 Single radial immunodiffusion (SRID) 결과는 아무 영향이 없음을 보였다. SRID 결과가 ELISA 결과 보다 더 정확하며 신뢰할 수 있기 때문에 단일클론항체는 그 자체의 분비를 저해하지 않음을 알았다.
세포 증식에 대한 암모니아의 독성은 회분식 배양에서 생성되는 농도인 3-4 mM 보다 2배 이상 높은 7-10mM 에서 보이므로 암모니아는 세포농도 조절에 영향을 끼치는 주된 요인이 아니었다.
Spent medium을 배양액에 30% 로 첨가했을 때 세포 증식은 영향받지 않았다.
