A new restriction endonuclease, AtuS I, was isolated from $\underline{Agrobacterium}$ $\underline{tumefaciens}$ SSI by the following steps: streptomycin sulfate fractionation, ammonium sulfate fractionation, phosphocellulose(Pll) column chromatography, CM-sepharose column chromatography, Heparin-agarose column chromatography, and Hydroxylapatite column chromatography.
From the comparison of digestion patterns on various DNAs, it was demonstrated that AtuS I endonuclease recognizes the same sequence as BstN I (5'-CCAGG-3' or 5'-CCTGG-3'). AtuS I enzyme cleaves lambda DNA at seventy one sites, Adeno2 DNA at one hundred thirty six sites. But Type II restriction enzyme, AtuS i, can not cleave dcm methylated DNA.
AtuS I endoncuclease showes maximum activity at pH 8.0 and requires $Mg^{++}$ as the only cofactor. Also NaCl has no effect on enzyme activity at $37^\circC$.
Type II 제한효소 및 변형효소는 크기가 작고, 비교적 안정하며, 효소의 활성을 위하여 요구하는 것이 간단하고, DNA 이중나선상에서 염기서열을 특이하게 인식하는 성질을 보이고 있어서, 분자생물학에 있어서 해명하여야 할 과제의 하나인 DNA와 단백질간의 상호작용을 연구하는데 이상적인 모델로 이용되어 왔다.
한편, Type II 제한효소 및 변형효소는 DNA 상에서 특이한 염기서열 인식 능력 때문에, 재조합 DNA 연구에 유용하게 이용되고 있다.
본 실험에서 Type II 효소에 대한 연구의 하나로 박테리아인 $\underline{Agrobacterium}$ $\underline{tumefacieus}$ SSl으로부터 새로운 제한효소를 분리하여 이 효소들의 catalytic properties와 specificity에 대해 분석하였다. Asus 은 Agrobacterium tumfaciens SSl으로부터 streptomycin sulfate 분획 침전, (NH2)SO4, 분획 침전, phosphocellulose(P-11), CM-Sepharose, Heparim-agarose, Hydroxylapatite column chromatography를 하여 분리하였다. 이렇게 분리된 AtuS I 제한효소는 박테리오파아지 lambda DNA 에 71개, Adenoz DNA 에 136개, M13 DNA 에 2개의 절단부위를 갖는 BstN I 과 isoschizomer임이 밝혀졌으며 $5'-CC(^A_T)GG-3'$ 인식한다. 그러나 AtuS I 제한효소는 dcm methylated DNA 는 절단하지 못한다. AtuS I 제한효소의 활성에 미치는 여러가지 인자의 최적조건은 10 mμ Tris/HCl, pH 8.0, 10 mM MgC12, $37^\circ{C}$ 이며 NaCl 농도엔 영향이 없었다.
