The inducibility of cytochrome P-450 associated monooxygenase was studied in primary cultures of ault rat hepatocytes. Rats were pretreated with phenobarbital (PB) or 3-methylcholanthrene (3-MC) and hepatocytes were isolated from PB-, 3-MC-treated, and untreated rats by collagenase perfusion technique. At the initial time of isolation, 3-MC enhanced 7-ethoxycoumarine-0-deethylase, Aryl hydrocarbon hydroxylase and biphenyl-4-hydroxylase by a factor of 12,60 and 2.5, except for aminopyrine-N-demethylase, respectively. The activities of enzymes were maintained higher level until 72 hrs when compared to untreated groups. Phenobarbital-pretreatment showed similar inducibility, but the magnitutes in induced enzymes level were relatively low compared to those by 3-MC. To conform the enhanced effects of metabolizing capability, unscheduled DNA synthesis (UDS) by Aflatoxin $B_1 (AF-B_1)$ was measured 24 hr after isolation of hepatocytes. UDS induced by $AF-B_1$ was slightly increased in PB-pretreated hepatocytes while decreased at low dose of $AF-B_1$ in 3-MC-pretreated hepatocytes compared to that in naive hepatocytes. These results suggest that the metabolizing capability of primary cultures of hepatocytes is increased by pretreatment of rats with PB or 3-MC.
현재까지 간 세포 배양에 있어서 약물 대사 효소의 활성을 증대시키기 위하여 많은 연구가 진행되어 왔다.
본 실험에서는 간 세포가 일차배양에 적용시에도 높은 활성을 지니게하기 위하여 유도 물질을 쥐의 생체에 전 처리하였으며 배양중에 변화하는 약물 대사 효소의 활성도를 측정하였다.
약물 대사 효소의 화학 물질에 대한 대사 효과를 보기 위하여, 대사에 의하여만 독성을 띄는 발암물질인 Aflatoxin $B_1$을 간 세포에 처리해, 비 주기성 DNA 합성을 조사하였다.
전 처리한 쥐에서 분리한 간 세포의 일차배양시 매우 빠른 속도로 감소하였으나, 몇몇 효소 활성도는 상당한 시간동안 높은 수준에 머물러 있었다.
전 처리군에서의 Aflatoxin $B_1$ 에 의한 비 주기성 DNA 합성은 투여량에 따른 반응을 보여 주었으나, 비 처리군보다 현저한 증가는 보여 주지 않았다. 그러나, Phenobarbital 전 처리군에서는 비 처리군보다 약간의 증가는 있었고 3-Methylcholanthrene 전 처리군에서는 오히려 감소하는 경향을 보였다. 따라서 대사에 의해 활성화되는 발암물질의 효과를 측정하는 비 주기성 DNA 합성 평가에 있어서는 Phenobarbital을 전 처리하는 것이 좀 더 유리할 것이다.
Phenobarbital 또는 3-Methylcholanthrene 을 rat 에 전처리시 일차 배양 간세포의 대사 능력이 항진되었다.
