Human chorionic gonadotropin(HCG) has been used as a universal marker in the diagnosis of pregnancy and as a therapeutic marker during the clinical treatment of trophoblastic disease patients. A number of sensitive and specific methods have made the HCG assay a useful tool in the laboratory as well as in the clinical fields. We attempted to develop a sensitive, convenient ELISA method of determining HCG, applicable to clinical fields.
Subunits of HCG were isolated by an ion exchange chromatography and three protein peaks were obtained. Antisera against α and β-HCG were raised in rabbits and antibodies were purified by an affinity chromatography on whole HCG-Sepharose 4B. These purified antibodies were tested for reactivity with α-, β- and whole HCG and for cross-reactivity with three other analogous hormones, i.e., FSH, TSH, LH. Anti α-HCG strongly cross-reacted with these hormones. Anti β-HCG reacted specifically with β- and whole HCG but not with α-HCG. Moreover the anti β-HCG didn't show any cross-reactivity with FSH, LH or TSH.
Using the double antibody sandwich ELISA method, HCG levels were determined in the sera of 20 women with malignant trophoblastic diseases. A standard curve showing a lineality up to 10ugHCG/ml was obtained by the ELISA method. The sensitivity was calculated to be 40mIU/ml. When the ELISA values were compared with those of RIA, the two methods were shown to be significantly correlated with each other.
인체 융모성 성선자극 호르몬(Human Chorionic gonadotropin)은 인체의 태반에서 분비되는 당단백질 호르몬이다. 이 물질은 정상적인 임신부와 영양배엽종양(trophoblastic disease)에 걸린 환자의 뇨와 혈중에서 다량으로 검출됨이 알려져 왔다. 본 실험에서는 이 호르몬을 효소 면역학적 방법으로 정량적으로 측정하고 다른 유사 호르몬과의 교차반응을 조사하고자 하였다.
먼저 HCG를 이루고 있는 2개의 subunits를 이온교환 크로마토그래피를 이용하여 분리하였고, 분리된 α, β-HCG 를 각각 토끼에 면역화시켜 항혈청을 얻었다. 이 항혈청에서 항원과 반응하는 특이 항체를 친화성 크로마토그래피를 통하여 분리하였다. 이렇게 분리된 항체와 다른 유사 호르몬(여포 자극호르몬, 갑상선자극호르몬, 황체화호르몬)과의 교차반응성을 살펴 보았을때 항 α-HCG 는 이들 유사호르몬과 강하게 반응하였고, 항 β-HCG는 전혀 반응성을 나타내지 않았다.
환자의 혈청에 있는 HCG 를 측정하기 위하여 항 β-HCG 에 alkaline phosphatase 를 결합시켜 항체-효소 복합체를 만들었다.
이 실험에서 사용한 효소면역학적 방법으로는 HCG 를 최대 10ug/ml 최소 10ng/ml 까지 측정할 수 있었다. 또 이 방법과 방사성 면역학적 방법으로 측정된 값을 비교할 때, 본 효소 면역학적 방법으로도 HCG 를 정량적으로 측정할 수 있음을 알 수 있었다.
