Stu I, Type II restriction endonuclease, has been highly purified. The amount (1,000,000 units) of the enzyme isolated from 100 g (wet weight) of Streptomyces tubercidicus (ATCC 25502) cells was at least 100 times greater than that of restriction endonucleases from other kinds of restriction enzyme harvoring microorganisms.
For the purification of Stu I restriction endonuclease, DEAE-Sephadex (A-50), QAE-Sephadex (A-50), and Heparin-Agarose column chromatography have been performed after ammonium sulfate fractionation of the crude extract.
The purified enzyme is free of contaminating with exonucleases and nonspecific nucleases, as judged by agarose gel electrophoresis after for a long incubation (48 hours) at 37℃ with bacteriophage lamda DNA.
Stu I endonuclease requires $Mg^{++}$ for its activity. But, it can not be replaced with $Ca^{++}$ and $Zn^{++}$. When $Mn^{++}$ is used instead of $Mg^{++}$, Stu I endonuclease shows unusual cleavage pattern on bacteriophage lamda DNA. The enzyme shows the maximum activity at pH 7.0 to 8.0, 0 to 10 mM NaCl, 20 to 30 mM $Mg^{++}$ and 37 to 45℃. The sulfhydryl compound is not necessary for Stu I restriction endonuclease activity.
Type II 제한효소인 Stu I이 높은 순도로 정제되었다. 100 g의 $\underline{Streptomyces} \underline{tubercidicus}$ (ATCC 25502)로 부터 1,000,000 Units의 효소가 분리되었으며, 이 양은 다른 제한효소를 지닌 미생물로 부터 분리된 제한효소와 비교하여 100 배 이상이다.
Stu I의 정제를 위해 crude extract의 ammonium sulfate fractionation 후 DEAE-Sephadex(A-50). QAE-Sephadex(A-50) 그리고 Heparin-Agarosse column chromatography를 행하였다.
정제된 효소는 $\lambda$ DNA를 37℃에서 48 시간 동안 반응시켜 한천 gel 상에서 전기영동한 결과, Exonucleases와 Non-specific nucleases로 부터 거의 순수함이 밝혀졌다.
Stu I의 활성에 $Mg^{++}$ 을 필요로하나 $Ca^{++}$, $Zn^{++}$ 로 대치될 수 없으며 $Mn^{++}$ 으로 대치되면 $\lambda$ DNA 에 비정상적인 절단 형태를 보인다. 이 효소는 pH 7.0 - 8.0, 0 - 10 mM NaCl, 20 - 30 mM, 37 - 45℃ 에서 최적 활성을 나타낸다. Sulfhydryl 화합물은 Stu I의 활성에 영향을 미치지 않는다.
Type II 제한효소인 Stu I이 높은 순도로 정제되었다. 100 g의 $\underline{Streptomyces} \underline{tubercidicus}$ (ATCC 25502)로 부터 1,000,000 Units의 효소가 분리되었으며, 이 양은 다른 제한효소를 지닌 미생물로 부터 분리된 제한효소와 비교하여 100 배 이상이다.
Stu I의 정제를 위해 crude extract의 ammonium sulfate fractionation 후 DEAE-Sephadex(A-50). QAE-Sephadex(A-50) 그리고 Heparin-Agarosse column chromatography를 행하였다.
정제된 효소는 λ DNA를 37℃에서 48 시간 동안 반응시켜 한천 gel 상에서 전기영동한 결과, Exonucleases와 Non-specific nucleases로부터 거의 순수함이 밝혀졌다.
Stu I의 활성에 $Mg^{++}$ 을 필요로 하나 $Ca^{++}$, $Zn^{++}$ 로 대치될 수 없으며 $Mn^{++}$ 으로 대치되면 λ DNA 에 비정상적인 절단 형태를 보인다. 이 효소는 pH 7.0 - 8.0, 0 - 10 mM NaCl, 20 - 30 mM, 37 - 45℃에서 최적 활성을 나타낸다. Sulfhydryl 화합물은 Stu I의 활성에 영향을 미치지 않는다.
