The binding of cytochrome c to phospholipid vesicle is studied by using centrifugation method at various pH and ionic strength. The binding curve of cytochrome c to liposome is hyperbolic, leading to the suggestion that the vesicle has identical and independent binding sites of limited numbers and is bound with the same microscopic dissociation constant.
The binding is significant at low ionic strength, but it's pH dependence is complicated. At high ionic strength, the binding is not observed above pH 4.0. Blow this pH, the extent of binding is increased with decreasing pH. The binding is reversible at pH9.0, but at pH3.0, part of cytochrome c remained bound to the vesicles upon dilution. It appears that the cytochrome c is bound to the vesicles through electrostatic interaction at high pH between positively charged protein and negatively charged polar head group of liposome while at low pH, the hydrophobic interaction may be involved.
미토콘드리아의 내막에서 전자전달계의 전자 운반체로써 존재하는 Cytochrome C 가 인지질막 과의 상호 작용을 연구하는데 이용되어 질수 있다. 양전하를 띠고 있는 Cytochrome C와 음전하를 띠는 인지질막 간의 결합곡선은 hyperbolic한 모양을 나타내었다. 이로써 이러한 인지질 막은 cooperativity가 없는 독립적인 반응 부위를 가지고 있으며, 모든 반응부위가 동일한 값의 해리 상수를 가진다는 것을 알 수 있다. 낮은 이온강도 에서 pH 에 따른 결합은 복잡한 양상을 나타내었다. 하지만 이온 강도를 크게 증가시킨 후 pH 4.0 이상 에서는 모든 결합이 제거 되어지는 반면에 pH 4.0 이하에서의 결합은 pH 감소됨에 따라 증가하였다. 가역성 조사에서 pH 9.0 에서는 결합이 가역적이었으나 pH 3.0 에서는 Cytochrome C 의 일 부분이 소수성 부분에 결합되어 비가역적인 반응을 나타내었다. 이로써 Cytochrome C는 높은 pH 에서 양전하를 띤 단백질과 음전하를 띤 인지질막 간에 이온 결합에 의해 단백질이 결합되지만 낮은 pH 에서는 hydrophobic interaction 이 부분적으로 관여하고 있다.
