The objective of present work was to asses the possibility of the protoplast formation of $\underline{Rhodotorula} \underline{glutinis}$ completely by enzymatic method.
The main lytic enzyme to hydrolyzed the $\underline{Rh}. \underline{glutinis}$ cell was identified as mannanase and protease in the induced exoenzyme of F-5 fungus isolated from soil.
$\underline{Penicillium} \underline{wortmanni}$ having high mannanase activity was selected, and induced exoenzyme of this fungus was able to promote the lysis of the fractionated cell wall and $\underline{Rh}. \underline{glutinis}$ intact cell in growing phase.
Among the carbon substrates selected to induce mannanase from $\underline{P}. \underline{wortmanni}$, AWY gave more excellent production than any other carbon sources examined, even though cellulose, glucose, and mannose can be used as carbon source for lytic enzyme production.
In lytic system of $\underline{P}. \underline{wortmanni}$, mannanase, β-galactosidase, and β-mannosidase were separated by Sephadex G-100-50 column chromatography. Cell lysis was observed up to 80\% in the TED-pretreatment cell suspension with reconstituted lytic enzyme system. This effect may be due to the hydrolysis of the fucogalactomannan sieve, the outer layer of cell wall, to be loosened by the pretreatment of dithiothreitol, and then, the degradation of glucomannan structure responsible for the rigidity of the cell wall.
Mannanase from $\underline{P}. \underline{wortmanni}$ had the optimum condition at 30℃, acidic pH.
이 연구의 목적은 효소적 방법을 이용하여 균체내 유지 생성 효모로 알려져 온 $\underline{Rhodotorula} \underline{glutinis}$ 의 원형질체 형성의 가능성을 증대시키는데 있다. 토양으로 부터 분리된 F-5 fungus 의 세포의 효소에서는 $\underline{Rh}. \underline{glutinis}$ 세포를 파괴하는 중요 효소로써 mannanase 와 protease 임을 알 수 있었다.
높은 mannanase 효소 활성도를 갖고 있는 $\underline{Penicillium} \underline{wortmanni}$라는 균체를 선택하여 $\underline{Rh}. \underline{glutinis}$ 세포에 작용시켜 본 결과 세포가 파괴 되었으며, 그 분리된 세포벽 물질도 분해시켰다.
$\underline{P}. \underline{wortmanni}$로부터 높은 mannanase 생성을 얻기 위한 실험으로 여러 탄소원을 공급해 본 결과 AWY 가 가장 높은 효소 생성도를 얻었다. $\underline{P}. \underline{wortmanni}$의 세포벽 효소 씨스템은 mannanase 와 β-galactosidase, 그리고 β-mannosidase 로 이루어졌음을 Sephadex G-100 column 크로마토그래피로 분리하여 알 수 있었고, dithiothreitol 을 전처리한 Rh. glutinis 에 이들 효소를 재조합하여 반응시키니 80% 정도의 세포 분해가 일어났다. 이는 세포벽 바깥 충인 fucogalactomannan이 dithiothreitol 에 의해 느슨해지면서 효소들 에게 분해된 것으로 인한 효과로 짐작된다.
$\underline{P}. \underline{wortmanni}$의 mannanase 는 30℃ 에서 그리고 산성 pH 조건에서 적정 조건을 가지고 있었다.
