The preparative isolation of lipid globules from $\underline{Rhodotorula} \underline{gracilis}$ NRRL Y-1091 grown in nitrogen limited condition was carried out by flotation method with rate-zonal centrifugation in Ficoll linear density gradient.
For the recovery of intact lipid globules, such experimental conditions as cell disruption method, gradient density and centrifugal force were selected.
Phase contrast micrograph showed that $\underline{Rh}. \underline{gracilis}$ grown under nitrogen limited condition formed intracellular lipid globules.
The lipid globules in whole cells and those isolated from whole cells were stained by treatments with such cationic dyes as neutral red or Toluidine Blue 0. Lipophilics dyes such as Sudan black or Nile Blue a stained both lipid globules in whole cells and those isolated from cell lysate.
Lipid globules disrupted when suspended in diluted osmotic stabilizer(Sorbitol + mannitol) buffer solution containing at a concentration between 0.8 M and 0.7 M, but below 0.7 M, lipid globules increased in volume, and again lipid globules ruptured below 0.1 M. The lipid in lipid globules was composed mainly of neutral lipids (87.8%, W/W) predominantly as triacylglycerols (71.8% of neutral lipids). Phospholipids were detected in lipid globules.
The quantity of sterolesters included in lipid globules were detected in a considerable amount (19% of neutral lipid). The major components of phospholipids in lipid globules and in whole cells phosphatidylcholine (38.6%) and phosphatidylserine (42.8%), respectively.
The major fatty acid components of neutral lipid of whole cells and lipid globules are palmitic, oleic, and linoleic acid.
The degree of fatty acid unsaturation of neutral lipid in whole cells was higher than that in lipid globules.
본 실험에서는 nitrogen limited condition에자란 $\underline{Rhodotorula} \underline{gracilis}$ NRRL Y-1091 로부터 지방구의 분리에 대한 방법이 선택되고 이 방법으로부터 분리된 지방구의 여러가지 성질과 지방분석이 연구되었다. 지방구는 Ficoll linear density gradient에서 flotation method를 사용하여 rate-zonal centrifugation에 의해 분리되었다. 또한 phase contrast microscopy 에 의해$\underline{Rh}. \underline{gracilis}$ 내의 지방구의 존재가 확인 되었으며 분리된 지방구는 지용성염료 (lipophilic dye)로 확인 되었다. 분리된 지방구로 부터 삼투압특성이 연구된 결과$\underline{Rh}. \underline{gracilis}$ 의 지방구는 막 구조로 되어 있으며 막 구조의 삼투압 특성이 다른 두가지 이상의 지방구로 되어 있음이 밝혀졌다. 또한 지방분석에 의한 결과 지방구는 주로 중성지방 (87.8%)으로 구성되어 있으며 중성지방은 주로 triacylglycerol 로 (71.8%) 이루어져 있었다. 중성지방에서 sterol ester 가 다량검출 (19%) 되었으며 phospholipid도 소량 검출되었다. 지방산 구성과 지방조성에 있어서 phospholipid 에서 다른 두 지방(Neutral lipid, Glycolipid)보다 현저한 차이가 있음이 관찰되었으며 이것은 지방구의 막 구조 전체 세포 (whole cell)의 막 구조 사이에는 상당한 차이가 있음을 나타낸다.
중성지방에서 지방구의 불포화도가 전체 세포의 불포화도 보다 더 작음이 나타났다.