The possibility of the mutagenesis using $underline{M}. \underline{rosaria}$ protoplasts were investigated. The optimized condition for mutagenesis and practical mutant selection were described in this paper. The maximum yield of mutants was obtained by treating protoplasts for 15 to 30 min with 50㎍/㎖ of NTG in P buffer at pH 7.6.
Under that condition, more than 4% of the survivors are auxotrophs and survival is of the order of 40%.
An intercalating agent, acriflavin, was successfully employed for curing $\underline{Micromonospora} \underline{purpurea}$ using mycelial fragments as well as protoplasts.
Up to 90% of colonies were shown to have lost their antibiotic producing ability after treatment with acriflavin at the concentration of 0.5㎍/㎖.
A plasmid DNA band was detected by an agrose gel electrophoresis from the parental strain.
Some intermediates and intermediate analogs were supplemented to the antibiotic-nonproducing cured strain and the results were analyzed.
The responses of each strain were somewhat different, and the results indicated that complex phenomena might be caused by acriflavin treatment, including loss of a plasmid which is involved in gentamicin production.
This result is somewhat different from those obtained by testing some $\underline{Streptomyces}$ spp. producing other aminoglycoside antibiotics, which indicated simple loss of plasmids by curing agent.
프로토플라스트를 이용하여 $\underline{Micromonospora} \underline{rosaria}$ 균주에 돌연변이를 실시하였다. 돌연변이의 최적조건을 결정하였고 그 조건을 이용하여 실제적으로 돌연변이주를 구하였다. 최대 효율은, 프로토플라스트를 pH 7.6 의 p buffer 에서 NTG 50㎍/㎖ 농도로 15분 - 30분간 처리했을때 얻어졌으며, 그 경우 생존율은 40% 였고 그중 4% 가 영양 요구 주였다.
또한 acriflavin 을 사용하여 $\underline{M}. \underline{purpurea}$ 균주의 curing 실험을 실시하였다. Acriflavin을 0.5㎍/㎖ 농도로 처리하였을때, 프로토플라스트를 이용한 경우 90% 이상의 처리균주가 항생제 생성능을 소실 하였다. 또한 직접적으로 agroase gel 전기영동을 이용하여 plasmid band 를 확인하였다.
몇 intermediate 및 intermediate analog를 항생제 생성능 소실균주에 투여 하였을 때 균주들의 반응을 분석하였다. 그때 각 균주의 반응은 서로 달랐으며, 그 결과로서 acriflavin 처리시에 gentamicin 생성에 관여하는 plasmid 소실을 비롯한 복잡한 현상이 일어난다는 것을 추측 할수 있었다.
위의 결과는 curing agent에 처리했을때 aminoglycoside 항생제를 생성하는 Streptomyces 몇 종이 단순한 plasmid 소실현상을 보인것과는 다른 결과이다.
