Mode of $CaCl_2$ mediated transformation in E. coli was studied with using PBR322 DNA and Charon4 DNA. $CaCl_2$ and heat shock was essential for transformation of E. coli. Optimal transformation occurred in 50mM $CaCl_2$ and for 2 min of heat shock at 42℃.
Transformation occurred by heat shock with $CaCl_2$ but further incubation in ice for 30min increased the transformation frequency. E. coli cells that heatshocked in $CaCl_2$ were transformable with foregin DNA and heat-shock of the mixture (donor DNA and recipient cells) was not essential. But heat-shock concerned in not only inducing competency but also uptake of foreign DNA. $CaCl_2$ had an effect on removal of transformation barrier of E. coli cells, rather than conformational change of donor DNA.
$CaCl_2$ 에 의한 대장균의 형질변환 과정을 plasmid pBR 322 DNA와 phase λ Charon 4 DNA 를 사용하여 연구하였다. 외부의 DNA 를 받아들일수 있는 최적조건과 이때 $CaCl_2$, heat shock등의 역할을 주로 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
(1) 최적조건은 $CaCl_2$ 농도 50 mM, 42℃ 에서 2 분간 heat-shock, heat shock후에 30분간의 0℃ 에서 보관 등 이었다.
(2) $CaCl_2$는 DNA 의 형태를 변화시킨다기 보다는 대장균의 외부 DNA의 전달 저해요인을 변화시킨다는 점을 알았다.
(3) $CaCl_2$ 존재하 에서 heat-shock을 주는 경우 이미 대장균은 외부의 DNA 를 받아 들일수 있는 상태로 전환된다.
(4) Heat-shock은 대장균이 외부의 DNA 를 받아들일수 있는 상태로 전환시킬뿐만 아니라 외부 DNA 의 흡수에도 관여한다.
