Soybean lipoxygenase (E.C.1.13.11.12) was purified by ammonium sulfate fractionation, affinity chromatography on linoleate-aminohexyl Sepharose 4B and DEAE-cellulose chromatography.
Purification of lipoxygenase-2 through affinity chromatography at PH 6.8 resulted in 6-fold purification and yield of 91%. However, linoleate-aminoethyl Sepharose 4B did not retain a significant amount of lipoxygenase. Further purification was conducted through DEAE-cellulose chromatography with the factor of 4-fold, and the yield was 46 % with respect to lipoxygenase-2. Overall purification of lipoxygenase-2 was 32.4-fold, and yield was 28.5 %. The purfied lipoxygenase-2 was almost homogeneous, electrophoretically.
The Km values of lipoxygenase-1 and -2 for linoleic acid were 0.15 mM and 0.39 mM, respectively. And the activation energies of the reactions catalyzed by lipoxygenase-1 and -2 were 16.2 kcal/mole and 39.6 kcal/mole, respectively. Molecular weight of lipoxygenase was determined from gel chromatography on Sephadex G-150 to be 102,000.
When lipoxygenase-2 was subjected to be reacted with arachidonic acid, and subsequently reduced with sodium dithionite, a material from ether extracts of this reaction mixture seemed to have some of prostaglandin F_{2α}, which was identified through thin layer chromatography.
Lipoxygenase (E.C. 1.13.11.12)를 대두로 부터 affinity chromatography 방법과 DEAE-cellulose chromatography 방법으로 분리, 정제 하였다. Affinity chromatography 에서는 흡착제로서 linoleate-aminohexyl Sepharose 4B 를 사용 하였으며, pH 6.8 에서 시행한 결과 lipoxygenase-2 를 비교해 볼때 6배 정제 되었으며 수율은 91% 이었다. 이것을 다시 DEAE-cellulose chromatography 에 의해 약 4배 정제 되었으며, 수율은 46% 였다. 그리하여 전체적으로는 32.4 배 정제 되었으며, 전체 수율은 28.5% 로 얻어졌다. 여기서 얻은 효소는 전기 영동법에 의해 거의 단일 단백질로 되어 있음을 볼수 있었다.
이 효소의 linoleic acid 에 대한 Km 은 lipoxygenase -1과 -2에 대해 각각 0.15 mM, 0.39 mM 로 나타났다. 그리고 이 반응의 활성화 에너지는 각각 16.2 Kcal/mole, 39.6 Kcal/mole 이었다. Sephadex G-150 을 이용한 gel chromatography 방법으로 부터 이 효소의 분자량을 측정한 결과 102,000 으로 나타났다.
여기서 얻은 효소를 arachidonic acid 와 반응 시킨후 sodium dithionite 로 환원시킨 다음 ether 로 추출한 물질 중에 prostaglandin $F_{2\alpha}$로 보이는 소량의 물질이 포함되어 있음을 TLC 방법에 의해 확인 하였다.
