The β-D-glucosidase (ED. 3.2.1.21) as a component of cellulase was isolated from the culture filtrate of the cellulolytic microorganism, $\underline{Trichoderma koningii}$, and was purified partially by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephadex ion-exchange chromatography and gel filtration with Sephadex G-75 and G-150.
A partially purified preparation of β-D-glucosidase was nearly free from the other cellulolytic activity by Cl and Cx, and the specific activity of the final preparation was obtained as 16.14 units per mg protein which represents about 33-fold purification over the crude culture filtrate.
The enzyme was specific for the substrate having β-1, 4glucosidic bond with a terminal glucose molecule and the Km value for the p-nitrophenyl-β-D-glucoside was found to be $4.9\times10^{-5}$M. The enzyme was relatively stable at physiological condition, and the activity of β-D-glucosidase was optimal at pH$ 4.5 and 40℃.
The activation energy for p-nitrophenyl-β-D-glucoside was 13.4 Kcal $mole^{-1}$ from Arrhenius plot. Most metal ions except $Ca^{++}$ ion did not effect on the enzyme activity.
섬유소 분해 능력이 있는 $\underline{Trichoderma koningii}$의 배양액으로 부터 cellulase의 한 성분인 β-glucosidase를 정제하고 이의 여러 특성을 알아 보았다.
정제 과정은 4단계로 이루어지며 ammonium sulfate에 의한 침전, Sephadex G-75에 의한 gel-filtration, DEAE-Sephadex에 의한 이온 교환 크로마토그라피, 마지막으로 Sephadex G-150에 의한 gel-filtration의 순서로 행하였다
정제된 효소의 비활성도는 출발 조효소에 비해 33배의 증가를 보였으며, Cl과 Cx의 활성을 거의 나타내지 않았다.
효소는 β-1,4-glucosidic bond에 특이적이었으며 P-nitrophenyl β-D-glucoside에 대한 Km값은 $4.9\times10^{-5} M$이었다.
효소의 활성이 유지되는 pH 범위와 온도 범위는 각각 pH 2 ~ 6. 상한 온도 50℃로 나타났다. 효소활성은 pH 4.5에서 가장 컸으며 p-nitrophenyl β-D-glucoside 를 기질로 했을 때 Arrhenius plot에 의해 구해진 활성화 에너지는 $13.4 Kcal \cdot mole^{-1}$ 이었다.
여러 단당류, 이당류가운데서 glucose와 cellobiose 는 각각 17%, 10%의 저해 효과를 주었다. 그리고 대부분의 금속 이온은 효소 활성에 영향을 미치지 않았으며, 다만 $Ca^{++}$ 이온이 약 20%의 활성화 효과를 나타냈다.
실험 결과를 분석한 결과 활성 부위에는 $pK_1 = 4.1$ 과 $pK_2 = 6.1$의 두 carboxyl 기가 있는 것으로 짐작되었다.
