The water-soluble form of apoproteolipid((APL) from bovine brain myelin was found to bind with phosphdtidylcholine(PC)/phosphatidylethanolamine (PE) (6:4) vesicles below pH 5. The protein bound to vesicles was photoactively labeled with 3-(trifluoromethyl)-3-(m-[$^{125}I$] iodophenyl)diazirine ([$^{125}I$] TID) and was digested with trypsin. A [$^{125}I$]TID-labeled fragment with an apparent molecular weight of approximately 2500 Da was extracted. An APL fragment with an identical $M_r$ value was also obtained from the tryptic digestion of APL/vesicle complex without a prior labeling with [$^{125}I$]TID. Determination of amino acid composition and the identification of N-terminal amino acid residue of this unlabeled fragment showed that this protected segment is amino acid residues from Met-205 to Lys-228. In another experiment, the [$^{125}I$]TID-labeled APL obtained from the above experiment without proteolysis step was extracted and reconstituted into PC vesicles. Subsequent tryptic digestion of the exposed segment and comparison of the elution profile of the extracted polypeptides on Sephadex LH-60 column with published profile of these polypeptides indicated that the membraneinserted segment of the water-soluble form of APL when bound to vesicles is the C-terminal region of this apoprotein within the amino acid residues between Met-205 and Lys-268.
소의 뇌에서 정제한 myelin에서 만들어진 water-soluble APL과 인지질막과의 상호작용에 관하여 알아보았다. 이 단백질은 낮은 pH에서 model 인지질 막인 PC/PE (6:4) vesicle에 결합되는 것이 밝혀졌으며, 소수성 표지물질인 [$^{125}I$]TID를 사용하여 APL을 막내에서 photoactivation시킨후 trypsin으로 처리하였을 때, 약 2,500 Da정도되는 부분이 인지질막에 파고 들어가게됨을 SDS-PAGE 상에서 확인하였다. Folch-Pi에 의한 방법으로 추출하였을때, 이 부분은 아래층인 chloroform층에 존재하였으며 Sephadex LH-60 column chromatography방법으로 확인하고 분리할 수 있었다. Amino 말단의 amino산 분석과 이 부분의 amino산 조성을 분석함으로써 이 부분이 전체 amino산 서열중 Met-205에서 부터 Lys-228부분임을 알 수 있었다. 이 결과를 확인하기 위하여 [$^{125}I$]TID로 표지된 APL를 PC 인지질막으로 reconstitution시킨 후 trypsin으로 처리하고 잘려진 부분들을 Sephadex LH-60 column chromatography로 분획하였을 때, 위에서 밝혀진 Met-205에서 Lys-228까지의 부분을 포함하고 있는 Met-205에서 Lys-268까지의 부분이 방사능을 띄고있는 것으로 확인할 수 있었다. 또한 여러 조성의 인지질막을 사용하였을 때에도 같은 부분이 인지질막에 파고 들어간다는 사실을 역시 [$^{125}I$]TID를 사용하여 알 수 있었으며, disulfide 결합이 없는 water-soluble Cm-APL의 경우에도 같은 결과가 얻어졌다. 따라서 막의 조성은 water-soluble APL이 막에 파고 들어가는 양상을 바꾸지 못하였으며, 또한 disulfide 결합도 영향을 주지 못한다는 사실을 알게 되었다. 이러한 결과로부터 막내재 단백질이 인지질막을 통과할 때에는 인지질 막과 단백질간의 상호작용뿐만 아니라 단백질 자체의 특성도 또한 중요한 요인으로 작용할 것으로 생각되어진다.
