Biochemical mechanisms by which NF-κB transcriptional activity is modulated by nuclear protein Daxx and SPOP were proposed. Both chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay and electrophoretic mobility shift assay (EMSA) have confirmed Daxx-mediated repression of transcriptional competence of NF-κB in HeLa cells. Overexpression of Daxx repressed the expression of NF-κB-regulated genes such as IκBα and IL8. Coimmunoprecipitation assay revealed the existence of intermolecular association between endogenous Daxx and p65 subunit of NF-κB stimulated by TNFα. The sensitization of TNFα-induced apoptosis by Daxx involves the downregulation of NF-κB dependent transcription of antiapoptotic c-FLIP in HeLa cells undergoing TNFα-induced apoptosis. Daxx-mediated repression of NF-κB transactivation is suggested to correlate with the inhibition of p65 acetylation by Daxx. Based on the finding that Daxx binding N-terminal side of p65 includes the major sites of acetylation mediated by p300/CBP, the physical interaction betweenDaxx and p65 may provide a functional framework for the inhibition of p65 acetylation by p300/CBP and subsequent repression of NF-κB transcriptional activity. Also observed was the inhibition of NF-κB transcriptional capacity by SPOP which interfere with the DNA binding ability of NF-κB to its recognition in the nuclei of cotransfected HeLa cells.
NF-κB 단백질은 초파리에서 포유동물에 이르기까지 잘 보존된 전사 인자로서 여러 면역 반응에 중요하다. 또한 여러 자극에 대해 하위 유전자의 발현을 조절하여 세포 운명을 조절하는 것으로 알려져 있다. NF-κB의 전사 활성은 cytokine 뿐만 아니라 여러 세포 내 단백질을 통해서 조절이 되며 잘못된 NF-κB 활성 조절은 여러 병이나 암의 원인이 된다. Daxx 단백질은 핵 내 단백질로서 여러 전사인자의 활성을 조절한다고 보고되고 있으며 NF-κB 또한 Daxx 단백질에 의해 활성이 조절될 수 있다는 가능성도 보고되었다. 하지만 Daxx에 의한 NF-κB 활성 조절의 기작이나 세포학적인 의미에 대해서는 연구가 이뤄지거나 알려진 바가 없었다.
본 연구에서는 Daxx를 과발현 시키면 NF-κB의 전사 활성이 감소하는 것을 확인하였고, 또한 Daxx 단백질을 과발현 시킬 경우 NF-κB 단백질과 DNA와의 결합이 감소하는 것을 확인하였다. Daxx는 활성화된 NF-κB의 핵 내 이동에는 영향을 주지 않았지만 전사활성에 중요한 아세틸화를 저해한다는 것을 확인하였다. 하지만 NF-κB의 아세틸화에 중요한 NF-κB의 인산화나 CBP와의 결합에는 Daxx가 중요하지 않다는 것을 알 수 있었다. Daxx 단백질은 TNFα자극을 준 NF-κB와 결합하였으며 아세틸화된다고 알려진 NF-κB의 N-말단 부위가 결합에 중요하다는 것을 확인하였다. 따라서, Daxx는 NF-κB에 결합하여 아세틸화에 steric hinderence를 부여한다고 생각해 볼 수 있다. Daxx의 과발현은 TNFα에 의한 세포예정사를 증가시키는 것을 확인하였고 이는 NF-κB의 하위 유전자로서 생존에 중요하다고 알려진 c-FLIP 단백질의 발현을 저해하기 때문이라는 것을 확인하였다. 본 연구의 결과를 통하여 Daxx 단백질은 NF-κB의 전사활성 조절을 보다 정밀하게 조절할 뿐만 아니라, 세포 운명 결정 과정에도 참여할 수 있다고 생각할 수 있다.
