Lipopolysaccharide binding protein (LBP) is a 60 kDa acute phase glycoprotein capable of binding to LPS of Gram-negative bacteria and facilitating its interaction with cellular receptors. This process is thought to be of great importance in systemic inflammatory reactions such as septic shock.
To study molecular basis of LPS binding and transfer by LBP, we overproduced and purified LBP in Hi5 insect cells using recombinant baculoviruses. The purified LBP was crystallized by vapor diffusion technique. The LBP crystals diffracted x-ray to 2.8Å resolution and the structure determination is under progress. The crystal structure of LBP will be used as a key of drug for use in the treatment of Gram-negative bacterial sepsis.
Toll 은 초파리에서 처음 발견되었으며 유전학적 연구결과 등배의 polarization 과진균류에 의한 감염을 막는 기능을 하는 것으로 알려졌다.
그 이후에 초파리의 Toll 과 IL-1R(interleukin-1receptor)의 세포내부 도메인이 서로 유사함이 밝혀짐으로써 척추동물에서 Toll 과 유사한 구조를 가진 TLR 들이 클로닝 되었다.
이 논문에서는 진균류나 그램-양성균에 의해 감염되는 것을 막기 위해 초파리에서 일어나는 Toll 신호과정에서 중요한 역할을 하는 Toll의 단백질 결정을 만들기 위한 정제 조건을 제시하고 있다. Toll 유전자는 cDNA 라이브러리에서 PCR 방법으로 확보하였으며, 곤충세포에서 baculovirus 시스템을 이용하여 Toll 단백질을 대량 발현시킬 수 있었다. 또한 Affinity, Ion exchange, Gel filtration과 같은 여러 크로마토그래피 방법을 이용해 발현된 단백질을 정제하여 고순도, 고농도로 얻었다. 정제된 단백질 결정을 최적화하여 Toll extracellular domain의 판형 결정이 생기는 조건을 얻었다. 그러나 Toll 단백질이 X-ray beam을 회절하지 않아서 회절 능력을 보이는 결정을 얻기 위한 결정화 조건을 찾으려고 노력하고 있다.
