Daxx-mediated transcriptional regulation was modulated by a speckled POZ domain protein SPOP which was first identified as an auto-antigen from the serum of a scleroderma patient. This is the report on the biochemical and functional interactions between Daxx and SPOP. The COOH-terminal region of Daxx interacts with the NH2-terminal region of SPOP. SPOP counteracts Daxx which binds with ETS1 transcription factor to repress the expression of ETS1 responsive gene. We observed that SPOP reverses Daxx-mediated transcriptional repression of MMP1 gene through inhibiting the binding of Daxx with ETS1. Mutagenesis study suggests that the ability of SPOP to self-associate as well as its ability to bind with Daxx is important for the modulation of Daxx-mediated transcriptional repression. This study proposes that SPOP plays an essential role in maintaining the balance between ECM deposition and degradation.
Daxx 단백질은 Fas의 death domain과 결합하여 세포 예정사를 증가시키는 단백질로 처음 발견되었다. 그러나 Daxx knock-out mouse가 세포 예정사를 일으켜 embryonic lethality를 나타낸다는 보고와 함께 대부분의 Daxx는 핵 내에 위치한다는 보고는 Daxx가 오히려 anti-apoptotic하며 전사 활성을 억제하는 기작을 한다는 결론을 얻게 되었다. SPOP 단백질은 scleroderma 환자의 autoantibody에 의해 인식되는 핵내 항원으로 발견되었으나 세포내 기능에 대해서는 알려진 바가 없다.본 연구에서는 yeast two hybrid를 통하여 발견한 Daxx와 SPOP의 결합가능성을 세포 내에서 GST-pull down 방법으로 확인하였고, 핵 내에서 서로 같은 위치에 있다는 사실을 확인하였다. 또한, Daxx의 C 말단과 SPOP의 N 말단이 결합에 중요하며, SPOP의 C 말단은 SPOP의 self-association에 중요하다는 사실을 확인하였다. 이러한 Daxx와 SPOP의 결합은 Daxx의 전사 활성 억제에 영향을 미치게 되는데, Daxx에 특이적인 RNAi를 이용하여 이러한 SPOP의 영향이 Daxx에 의존적이라는 사실을 확인하였고, Daxx에 의해 전사 활성이 억제된다고 알려진 ETS1의 전사활성을 증가시키는 것을 확인하였다. 또한, Daxx에 의해 전사 활성이 억제된다고 알려진 NF-kB의 전사 활성은 SPOP을 과발현시켰을 때 오히려 더욱 억제된다는 사실을 확인하였고, E2F1의 경우는 ETS1과 마찬가지로 SPOP을 과발현시키면 Daxx에 의해 억제된 전사 활성이 다시 증가한다는 사실을 확인하였다. 본 연구의 결과를 통하여 SPOP이 Daxx의 전사 활성 억제 기작을 세포 내에서 보다 정밀하게 조절하는 인자라는 추측이 가능하다.
