To achieve enhanced cell growth and increased product concentration in serum free media, three non-animal derived hydrolysates were used as additive to serum free basal medium (SFM-G; SFM-YH2) developed by information of the previous work in our laboratory. According to the simplex lattice design, 10 media that have different proportions of yeastolate, soy hydrolysate, and wheat gluten hydrolysate were prepared. After Batch cultures of 3 rCHO cell lines producing anti-4-lbb antibody (H-1-5), hTPO (R-2-3-2), and ABC antibody (ABC 11-08) in 10 media prepared before, the effect of each medium was analyzed by statistical program. For H-1-5 and ABC 11-08 cells, yestolate showed strong effect on enhancing specific production rate (q) and negative effect on growth of cells. Wheat gluten hydrolysate showed strong effect on growth of cells when mixed with other hydrolysate. Soy hydrolysate showed positive (not highest) effect on growth and production. For R-2-3-2 cells, yeastolate was most suitable additives that do not need to mix with other hydrolysate. Then, batch cultures of 3 rCHO cell line using optimized proportions of 3 hydrolysates obtained by program were carried out to confirm the result predicted by the simulation. Further, for ABC 11-08 the effect of hydrolysates mixture on the growth of cells was maintained through over 6 passeges in SFM.
무혈청 배지에서의 Chinese hamster ovary (CHO) 세포의 성장과 외부단백질의 생산력을 높이기 위해서, 동물에서 유래되지 않은 3가지의 hydorolysate를 실험실에서 이전에 행해졌던 실험을 참고하여 조성된 무혈청 기본배지에 첨가하였다. Simplex 격자설계를 이용하여 yeastolate, soy hydrolysate, wheat gluten hydrolysate가 각각 다른 비율로 섞인 10가지의 배지를 준비하였다. 각기 다른 단백질을 생산하는 3가지의 CHO세포주를 앞에서 준비한 배지들에 현탁배양한 후 그 효과를 통계프로그램을 이용하여 분석하였다. Hydrolysate의 효과는 두 세포주에서는 비슷한 경향을 보였고 나머지 한 세포주에서는 이와 다른 경향을 보였다. 프로그램을 이용하여 각각의 세포주에 대하여 최적화된 hydrolysate의 비율을 구하였고, 이 비율에 따라 현탁배양하여 그 결과를 확인하였다. 더 나아가 혈청이 포함되지 않는 조건에서 연속 현탁배양을 하여 hydrolysate 의 효과가 지속되는 것을 확인하였다.
