This paper describes the novel strategy for on chip SUMOylation with using Spreeta sensor chip. It is clear that SUMOylation, one of the post translational modification, is very important cellular event in due consideration that SUMOylation regulates diverse cellular functions. Although, a small numbers of SUMO target proteins identified recently, it is obvious that the speed of discovering SUMO substrates will be accelerated when the high-throughput proteomic approaches apply to target screening. My study is based on that the Ubc9 is an essential SUMO conjugation enzyme to bind proteins including SUMO substrates. The protein chip immobilized with Ubc9 recognizes primarily Ubc9 binding proteins out of protein poll. Then, SUMOylation phenomenon as a specific sensorgram pattern was observed when GST tagged RanGAP1 and p53 proteins were applied. And then, the SUMO modified proteins were collected for qualitative analysis with mass spectroscopy. Also, the specific sensorgram pattern was not detected when GST tagged Ref-1 was layered on under same condition. It is believed that the data performed under in vivo is more reliable than the one under in vitro, because the SUMO modification is dynamic, with substrates undergoing rapid conjugation and deconjugation. But, it is significant work actualizing biological process engaging several protein complexes with such exemplary model system as SUMOylation on the Spreeta sensor chip and proposes new strategy to identify SUMO substartes by biomolecular interaction analysis mass spectrometry(BIA/MS).
이 논문은 스프레타를 이용한 수모일레이션 현상을 단백질 칩에서 구현하는 새로운 방법에 대해서 기술하고 있다. 수모일레이션 현상은 생체내의 단백질 합성 후 변형 과정 중의 하나로 다양한 세포의 기능을 조절한다는 관점에서 중요한 생체 활동이라고 말할 수 있다. 비록, 최근에 수모 단백질과 결합하는 소수의 단백질들이 밝혀졌으나, 최근의 신속한 대량 탐색을 가능하게 하는 기기를 이용하여 이들 단백질을 찾아내고자 한다면 훨씬 적은 비용과 시간으로 이들 단백질을 찾아낼 수 있을 것이다. 그래서, 이 연구는 수모가 단백질에 결합하는데 중요한 역할을 하는 Ubc9 프로테인을 중요시 하여 이 단백질을 프로테인 칩에 고정화 하는 것을 골자로 한다. 일단 Ubc9이 고정화 된 단백질 칩은 수모가 결합되는 단백질과 단지 Ubc9과 상호 작용하는 단백질 모두를 찾아내고, 여기에 수모일레이션이 일어날 수 있는 적절한 조건을 주어 RanGAP1과 p53 프로테인에 대해서 수모일레이션 현상을 단백질 칩상에서 구현한 후, 정성 분석을 위해 이들 프로테인을 칩에서 용출시켜 질량 분석기를 사용하여 신속한 대량 탐색을 가능하게 하였다. 비록 수모가 붙는 현상이 생체내에서 매우 동적이기 때문에 생체내에서의 반응에 대한 분석 결과가 생체 밖에서의 반응에 대한 분석 결과보다 더 가치 있다고 생각되나, 신속한 대량 탐색 방법을 이용한 수모가 붙는 프로테인을 찾아낼 수 있는 새로운 기술을 제안하였고, 또한 수모일레이션과 같은 서로 다른 여러 분자들이 관여하는 생명현상을 스프레터를 이용한 프로테인 칩 기술을 이용해서 구현하였다는 것과, SPR을 이용한 분석기기의 일반적인 활용 범위를 확장하였다는데 그 큰 의의가 있다고 하겠다.
