본 연구에서는 면역조절인자인 transforming growth factor β1 (TGF-β1)과 면역억제 물질인 aflatoxin $B_1$ (AF$B_1$), cannabinoid compounds의 작용기작을 연구하기 위하여, 면역활성에 필수적인 cytokine인 인터루킨-1 (IL-1)과 인터루킨-2 (IL-2) 유전자 발현에 미치는 영향을 알아보았다. TGF-β1은 accessory factor로서 활성화된 T-세포에 의한 IL-2생산을 조절한다고 알려져 왔다. 그러나, model T-세포인 EL4.IL-2 세포를 이용한 본 실험에서는 TGF-β1 단독으로도 IL-2 유전자 발현 및 그 단백질 생산을 유도할 수 있음을 알 수 있었다. IL-2유전자의 전사를 조절하는 전사인자들인 NF-AT, NF-κB, AP-1, Oct의 활성에 대한 TGF-β1의 영향을 electrophoreic mobility shift assay (EMSA)로 알아본 결과, NF-AT, NF-κB, AP-1의 DNA binding이 TGF-β1에 의해 크게 증가함을 알았다. 한편, constitutive expression을 보였던 Oct는 TGF-β1에 의해 DNA binding이 영향을 받지 않았다. $p(NF-\kappa B)_3-CAT$, $p(NF-AT)_3-CAT$, $p(AP-1)_3-CAT$를 이용한 transfection/CAT assay실험에서도, TGF-β1이 단독으로 CAT활성화를 유도시키는 결과를 얻었다. 따라서, T-세포에서 TGF-β1에 의해 증가된 NF-AT, NF-κB, AP-1의 활성이 IL-2 유전자 발현 및 그 단백질 생산을 유도하는 것으로 사료된다.
$AFB_1$이 IL-2 유전자 발현에 미치는 영향을 알아보기 위한 실험으로는 B6C3F1생쥐의 일차배양 흉선세포, 인간 T-세포인 Jurkat E6-1, 그리고 EL4.IL-2세포를 이용하였다. RT-PCR 방법으로 IL-2 mRNA 양을 측정한 결과, 일차배양 흉선세포와 Jurkat E6-1에서 phorbol-12-myristate-13-acetate/ionomycin (PMA/Io)에 의해 유도된 IL-2 mRNA생산을 $AFB_1$이 용량의존적으로 억제하였으나 EL4.IL-2세포에서는 아무 영향을 주지 못하였다. 또한 EMSA 실험결과, PMA/Io에 의해 유도된 NF-AT와 AP-1의 DNA binding이 $AFB_1$에 의해 크게 감소하는 반면 NF-κB와 Oct의 DNA binding은 영향받지 않음을 일차배양 흉선세포와 Jurkat E6-1에서 알 수 있었다. $p(NF-AT)_3-CAT$와 $p(AP-1)_3-CAT$을 Jurkat E6-1세포에 transfection한 실험에서도, $AFB_1$이 PMA/Io에 의해 유도된 NF-AT와 AP-1의 전사촉진능력을 크게 감소시킴을 알 수 있었다. 결론적으로, 면역억제제인 $AFB_1$은 NF-AT와 AP-1의 활성을 감소시켜 IL-2유전자 발현을 억제시키는 것으로 사료된다.
한편, cannabinoids의 원형인 cannabinol (CBN)과 $\Delta^9$-tetrahydrocannabinol $(\Delta^9-THC)$을 생쥐 탐식세포인 RAW 264.7세포에 처리한 결과, lipopolysaccharide (LPS)에 의해 유도되는 IL-1β유전자 발현이 용량의존적으로 감소하였다. LPS에 의한 IL-1β단백질의 분비도 CBN에 의해 억제됨이 ELISA를 통해 관찰되었다. IL-1β 유전자의 promoter부분을 결합해 제작한 reporter plasmid, pIL-1β(-1809/-2679)-CAT를 RAW 264.7세포에 transfection한 실험에서는 CBN과 $\Delta^9-THC$처리가 IL-1β 유전자의 promoter 활성을 억제시킴을 알 수 있었다. 또한, $\Delta^9-THC$처리에 의한 protein kinase A (PKA)활성의 감소를 관찰한 결과와 함께, cAMP analogues처리를 통해 CBN과 $\Delta^9-THC$에 의해 억제되었던 IL-1β mRNA발현이 회복된 결과는 cAMP/PKA를 경유하는 신호전달이 CBN과 $\Delta^9-THC$에 의해 억제되고있음을 보여주었다. 나아가, IL-1β 유전자 발현을 조절한다고 알려진 NF-κB, CRE, NF-IL6전사인자들에 대한 CBN과 $Δ^9-THC$의 영향을 관찰하기 위하여 $p(NF-\kappa B)_3-CAT$, $p(CRE)_3-CAT$, $p(NF-IL6)_3-CAT$를 이용해 transfection/CAT assay실험을 수행하였는데, RAW 264.7세포에서 LPS에 의해 유도되는 CAT활성의 감소가 세 가지 전사인자 모두에서 관찰되었다. 이러한 결과들은 cannabinoids가 cAMP/PKA신호전달을 억제시키고, 이로 인해 NF-κB, CRE, NF-IL6전사인자들의 활성이 저하되어 결국 IL-1β 유전자 발현이 억제됨을 시사한다.