Desulfurization genes were cloned from Gordona sp. CYKS1 and these genes were expressed in Escherichia coli under the heterologous promoters. Cloning of desulfurization genes were carried out by polymerase chain reaction (PCR) and their homology to previously cloned desulfurization genes of Rhodococcus sp. IGTS8 was 89%. The homology of deduced amino acids sequence was 86% in DszA, 86% in DszB, and 90% in DszC, respectively.
Desulfurization genes were expressed in E. coli. Two recombinant plasmid containing desulfurization genes were constructed using inducible trc and constitutive Bacillus promoter.
Nine E. coli strains were tested and 18 recombinant E. coli strains conferred with desulfurization activity were constructed.
Batch and Fed-batch culture were carried out to produce desulfurization enzymes and DszA enzyme in fed-batch culture was produced in the form of inclusion body. In batch culture, about 10% of DBT was conversed to 2-HBP.
고르도나 균주로부터 탈황유전자를 클로딩 하였고 그 유전자를 대장균에서 외부 프로모터를 이용하여 발현시켜 보았다. 탈황유전자의 클로닝은 PCR을 통해 실시하였고 얻어진 유전자를 이미 발표된 로도코코스 균주로부터의 탈황유전자와 비교 분석한 결과 유전자의 염기 서열이 약 89% 일치하였다. 아미노산 서열의 경우 DszA 효소는 약 86%, DszB 효소는 86 %, 그리고 Dszc 효소는 90%가 비슷하였다.
trc 프로모터와 바실러스 유래 프로모터를 사용하여 대장균에서 탈황유전자를 발현시켜 본 결과 실험된 9개의 대장균 모두 탈황능을 보였다.
발효조룰 이용하여 진탕배양, 유가식 배양을 실시한 결과 진탕배양의 경우 약 10%의 DBT가 2-FBP로 전환되었지만 유가식 배양을 통한 배양에서는 DszA 효소가 강한 trc 프로모터의 제어 하에서 활성을 잃어버린 단백질 인쿨루젼 바디(inclusion body)의 형태로 발현되어 DBT로부터 최종 산물인 2-HBP가 생산되지 않고 $DBTO_2$가 생산되었다. 단백질 발현 시스템의 최적화가 필요할 것으로 사료된다.
