The genomic RNA of Hepatitis C virus (HCV) contains a single large open reading frame for virion structural proteins and viral nonstructural polypeptides. HCV NS3 protein (p70) was predicted to be a serine-type proteinase, a nucleotide triphosphatase (NTPase), and an RNA helicase based on the presence of sequence motifs. We demonstrated that the NS3 protein expressed in insect cells possesses an NTPase activity. Employing the baculovirus system, we partially purified the NS3 protein fused to 6-histidine residues using metal-binding chromatography. It is revealed that an analog of p70, p47 was also expressed. The p47 protein did not seem to contain an N-terminal serine protease domain of the p70 protein, because p47 did not bind to a metal-binding column. The elutes containing p70 showed a specific NTPase activity. This activity was not found in the other elute fractions. NTPase activity was completely inhibited by the murine NS3 specific antibodies. Above results strongly suggest that NS3 protein of HCV contains NTPase activity.
C형 간염 바이러스의 genomic RNA는 구조적 단백질과 비구조적 단백질을 code하는 하나의 open reading frame을 가지고 있다. C형 간염 바이러스 NS3 단백질은 proteinase, NTPase, RNA helicase에 해당하는 sequence motif를 가지고 있다. 이번 실험에서 우리는 NS3 단백질이 NTPase 활성을 갖고 있다는 것을 증명하였다. 우리는 baculovirus expression system을 이용하여 6개의 histidine이 N-terminal에 연결되어 있는 NS3 단백질을 recombinant virus에 감염된 곤충 세포로부터 정제하였다. 이 실험으로부터 p70 이외에도 p47이 같이 발현되는 것이 밝혀졌다. 이 p47은 metal-binding column에 붙지 않으므로 p70의 N-terminal부위, serine type proteinase 부위가 제거된 것임을 추측할 수 있다. p70을 포함한 elute fraction은 NTPase activity를 나타내었으며, NS3를 포함하지 않은 fraction은 이 활성을 나타내지 않았다. 또한, 쥐의 NS3 단백질에 대한 antibody에 의해 이 활성은 완전히 억제되었다. 이 두가지를 통해 NTPase 활성은 p70과 관련이 있다고 결론을 내릴 수 있다. 마지막으로, p47단백질의 잠정적인 역할이 제시되었으며, NTP 분해를 통한 C형 간염 바이러스 복제 기작이 논의되었다.
