We developed a process to efficiently produce α-neoagarobiose hydrolase from Alcanivorax A28-3. Conventionally, a process for obtaining an enzyme in a strain includes cultivation, centrifugation, cell disruption, and purification.Traditional methods require an alternative, because cell disruption and purification steps have several limitations: costly, time consuming and protein denaturation. In this study, we have developed a novel platform via secretion system using a signal peptide and cell surface display system using an anchoring motif. Finally, the enzymes we obtained decompose neoagarobiose into galactose and 3,6-anhydro-L-galactose with galactose mol conversion of about 47% . This study has developed a system that can easily and cheaply obtain enzymes without the process of cell disruption and enzyme purification. In the near future, this study will be successfully applied to the production of 3,6-anhydro-L-galactose, a new material.
본 연구는 알카니보락스 유래의 네오아가로바이오즈 가수분해 효소를 효율적으로 생산하는 공정을 개발하였다. 기존의 균주 내의 효소 단백질을 얻기 위한 공정은 배양, 원심분리, 세포 파쇄, 정제의 과정을 포함한다. 기존 공정은 비용 및 시간 소모가 크고, 단백질 변성을 일으킬 수 있다는 점에서 대안이 필요하다. 본 연구에서는 신호 펩타이드를 이용하여 세포 밖으로 효소를 분비하는 시스템과 세포 표면에 효소를 부착시키는 세포 표면 발현 시스템을 이용하여 새로운 효소 생산 플랫폼을 제시하였다. 최종적으로 생산된 효소는 네오아가로바이오즈를 갈락토오스와 3,6-언하이드로-L-갈락토오스로 분해시켜 최대 47% 정도의 갈락토오스 몰 컨버젼을 얻을 수 있었다. 본 연구는 세포 파쇄와 효소 정제 과정 없이도 쉽고 적은 비용과 시간으로 효소를 얻을 수 있는 시스템을 개발하였다. 이번 연구는 향후 여러 잠재적인 가치를 지닌 신 물질인 3,6-언하이드로-L-갈락토오스 생산에 성공적으로 적용될 것으로 본다.
