TGF-$\alpha$ (transforming growth factor-$\alpha$) suppressed TCDD (2,3,7,8-tetrachloro dibenzo-p-dioxine)-induced EROD activity in a dose dependent manner in primary culture of mouse hepatocytes. As a result of comparison with a similar growth factor, EGF (epidermal growth factor), TGF-$\alpha$ appeared to have higher potency than EGF. Immunoblot analysis and RNA slot blot analysis also showed reduced P450 induction in the level of apoprotein and mRNA. These results indicated that suppression of TCDD-induced P450 IA1 by TGF-$\alpha$ was performed in mRNA level. The effect of TGF-$\alpha$ was also observed in PB-induced BROD activity. This result demonstrates that TGF-$\alpha$ can suppress several P450 activities as well as P450 IA1 activity. The suppressive effect of TGF-$\alpha$ was also showed as hepatocytes were pretreated with TGF-$\alpha$ for short time before TCDD addition. This result indicates that the initial signaling by TGF-$\alpha$ stimulation was crucial for suppression of P450 induction. To explore the relation between suppression of TCDD-induced P450 IA1 and initial signal transduction, the effects of various inhibitors which inhibit the key proteins that participated in signal transduction were examined. The G protein modulating agent, pertussis toxin (PT), was effective in recovery of suppressed EROD activity out of three kinds of inhibitors, those for PKC, Tyrosine kinase, and G protein. This observation indicates that PT-sensitive G protein may be engaged in signal transduction pathway for suppression of P 450 IA1 induction.
마우스 일차배양 간세포에서 TGF-$\alpha$ 는 TCDD 처리에 의해 증가된 EROD를 감소시켰으며 이러한 감소 정도는 TGF-$\alpha$의 농도가 증가함에 따라 비례하는 경향을 보였다. 또한 PB 처리에 의해 증가된 BROD 도 TGF-$\alpha$ 의 처리에 의해 감소하는 결과를 나타냄으로써 TGF-$\alpha$ 의 작용이 특정한 P450 에만 나타나는 현상이 아님을 입증했다. EGF와의 비교실험에서는 TGF-$\alpha$가 보다 큰 효과가 있는 것으로 나타났다. TGF-$\alpha$ 에 의한 P450 발현 억제 현상이 P450 합성 과정중 어느 단계에서 이루어지는지를 확인하기 위하여 WESTERN BLOT ANALYSIS 와 RNA SIOL BLOT ANALYSIS 를 수행했다. 그 결과 TGF-$\alpha$ 가 P450 단백질 양과 mRNA 양을 모두 감소시킴을 확인했다. 따라서 TGF-$\alpha$ 는 mRNA level 에서 P450의 발현을 조절함을 알 수 있었다. 다음 단계로 TGF-$\alpha$ 가 어떤 신호 전달 과정을 거쳐 P450의 발현을 저해하는지를 확인하기 위해 이 과정에 관여할 것으로 예상되는 여러 효소를 저해시켜 보았다. 이 실험을 위해 TYROSINE KINASE 저해제와 PROTEIN KINASE C 저해제, 그리고 G-PROTEIN 저해제를 시용했다. 그 결과 G-PROTEIN 저해제인 PERTUSSIS TOXIN 을 처리했을 때 TGF-$\alpha$ 의 효과가 나타나지 않음을 관찰했다. 이 결과로부터 TGF-$\alpha$ 가 G-PROTEIN을 경유한 신호전달 과정에 의해 P450 발현을 억제함을 예상할 수 있었다.