Transcripts of pGEM3ZT has been proposed to cause termination efficiency reduction [Lee, J. T., and Kang, C., (1992) Biochem. Int. 26, 163-170]. By transcription with incomplete sets of nucleotides, abortive transcripts were produced exclusively. To test the trans-acting activity, T7 promoter was destructed by HinfI digestion, T7 RNA polymerase and HinfI were removed by phenol extraction, and then the abortive products were included in the second reaction with a second template and newly added polymerase. Abortive transcripts of pGEM3ZT produced with any set of nucleotides have the activity. pET3a showed trans-acting antitermination activity if an incomplete set of nucleotides was supplied. It seems that abortive transcripts are trans-acting antitermination factor. The sequence of pGEM3T is identical to pGEM3ZT except few sites in initially transcribed region but it does not show trans-acting antitermination activity. The aberration from consensus promoter sequence at +4 position makes pGEM3ZT produce remarkable amount of abortive transcripts. Termination of transcription by T7 RNA polymerase and SP6 RNA polymerase at rrnBT1 E. coli terminator and termination by SP6 RNA polymerase and T3 RNA polymerase at T7 terminator TΦ were tested. Antitermination is not restricted to T7 RNA polymerase but rrnBT1 terminator is resistant to antitermination.
pGEM3ZT의 전사물은 T7 RNA 중합효소의 T7 전사종결제에서의 전사종결효율을 낮춘다. 불완전한 뉴클레오티드 조합으로 전사시킨 짧은 전사물을 만들 수 있다. 트랜스로 작용하는 활성을 시험하기 위해 T7 전사촉진제를 HinfI 제한효소로 절단하고 T7 RNA 중합효소와 HinfI을 페놀추출로 제거하고 짧은 전사물을 다른 템플리트와 새로 넣어 준 RNA 중합효소와 섞어 주었다. 모든 조건에서 새긴 pGEM3ZT의 짧은 전사물은 전사종결효율을 낮추었다. pET3a도 불완전한 조합의 뉴클리오티드로 반응시키면 반전사종결활성을 보인다. 따라서 짧은 전사물이 트랜스로 작용하는 반종결 인자인 것 같으로 보인다. pGEM3T는 초기에 전사되는 부위를 제외 하고는 모든 서열이 pGEM3ZT와 동일하나 반종결 활성은 없다. pGEM3ZT의 +4 위치에서 전사촉진제의 컨센서스 서열과 다르다. 이러한 차이가 pGEM3ZT를 많은 짧은 전사물을 만들도록 하는 것으로 보인다.
짧은 전사물이 전사종결효율을 낮추는 현상은 T7 RNA 중합효소에만 국한되는 것은 아니다. 그러나 E. coli의 rrnBT1 전사종결제의 종결효율에는 영향을 미치지 않는다.
