The separation of soybean trypsin inhibitor using reverse micellar system was investigated. Solubilization of the trypsin inhibitor was observed when the pH of the buffer was above isoelectric point (pI) of the enzyme, and de-solubilization was observed when pH was below pI. Among the buffer systems tested, 1.0 M $CaCl_2$ solution (pH 3.0) and 1.0 M NaCl solution (pH 11.5) were most effective for solubilization and de-solubilization, respectively. The optimum concentration of AOT in organic phase was 50 mM.
These optimized conditions were applied to two model samples and the real sample. In the case of a model sample composed of the same amounts of 7S protein and trypsin inhibitor, the specific activity was increased two folds, and in case of a model sample, composed of soluble soybean proteins isolate, the specific activity was increased 1.6 folds, when separating trypsin inhibitor from real sample of kwang Gyo, the specific activity was increased 1.56 folds. All trypsin inhibitors recovered by reverse micellar system were applied to SDS-PAGE and the resulting inhibitor was found to be highly pure.
역미셀계를 이용한 대두 트립신 저해제의 분리에 대해 연구하였다. 수용액의 pH 가 트립신 저해제의 등전점보다 낮을때 미셀상으로 회수되었다. 여러 완충 수용액을 시험한 결과, 1.0 M $CaCl_2$용액 (pH 3.0)과 1.0 M NaCl 용액 (pH 11.5)이 단백질의 용해와 회수에 가장 적당하였다. 미셀계의 AOT 농도는 50 mM 일때가 가장 효율이 좋았다.
위에서 찾은 최적조건을 두 모델계와 하나의 실제시료에 적용해 보았다. 등량의 7S 단백질과 트립신 저해제로 구성된 모델계에서는 비활성이 두배이상 증가되었고, 전수용성 단백질과 트립신 저해제로 구성된 모델계에서는 1.6배의 비활성 증가가 있었다. 광교 대두로부터 추출한 전유출물의 경우, 1.56배의 비활성 증가가 있었다. 역미셀계를 이용하여 추출한 모든 트립신 저해제를 SDS-PAGE로 확인한 결과 모두 매우 순수한 단백질임을 알 수 있었다.
따라서, 역미셀계를 이용하면 보다 복잡한 단백질 혼합물로 부터 순수하게 하나의 단백질을 분리해 낼 수도 있을 것이다.