The cellulase produced by $\underline{E}$. $\underline{coli}$ harbouring $\underline{C}$. $\underline{thermocellum}$ endo-β-1,4-glucanase gene was purified and characterized. Streptomycin sulfate fractionation, heat treatment, ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephadex A-50, and Hydroxyapatite column chromatography were employed for the purification. The purification procedures yielded a 40-fold purification of the enzyme with yield of 29%.
The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 40,000 dalton by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and gel filtration. The enzyme showed optimum activity at pH 5.0 and at 65℃. Viscometric assay showed that the enzyme behaved as an endoglucanase. The enzyme was insensitive against end product inhibition by glucose and cellobiose and resistant to organic solvents (ethanol, acetate, and lactate). The enzyme was sensitive to $Mn^{++}$, $CO^{++}$, EDTA, and $Hg^{++}$, but not to $Ca^{++}$, $Mg^{++}$, and $Zn^{++}$. Enzyme activity was stimulated by low concentrations of $Cu^{++}$, but inhibited by high concentrations of $Cu^{++}$.
The values of Km and Vm of this enzyme for CMC were 0.39 % and 268 units per mg protein, respectively. The Km an Vm for pNPC hydrolysis were 0.75 mM and 1.32 units per mg protein, respectively.
$\underline{C}$. $\underline{thermocellum}$ endo-β-1,4-glucanase 유전자를 함유한 $\underline{E}$. $\underline{coli}$ 에 의해 생성되는 섬유소 분해효소의 정제 및 특성을 조사했다.
Streptomycin sulfate 분획, 열처리, ammonium sulfate 분획, DEAE- Sephadex A-50, 및 Hydroxyapatite 관 크로마토그래피를 정제하는데 이용했다. 정제 단계에서 40 배의 정제율과 약 29 % 의 회수율을 얻었다. SDS-polyacrylamide 젤 정기영동과 젤 여과의 결과로 정제된 효소의 분자량은 40,000 이였다. 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0 및 65℃ 였다. 점도 측정법에 의해서 이 효소는 endoglucanase 로 밝혀졌다. 효소는 최종 생성물인 포도당과 cellobiose에 의한 저해효과를 나타내지 않으며, 유기용매들에 대한 저항성도 높았다. 효소는 $Mn^{++}, Co^{++}$, EDTA 및 $Hg^{++}$ 에 민감하나 $Ca^{++},; Mg^{++}$ 및 $Zn^{++}$ 에는 민감하지 않았다. 효소 활성도는 낮은 농도의 $Cu^{++}$에 의해 상승효과를 보였으나 높은 농도의 $Cu^{++}$에 의해 저하됐다. CMC와 pNPC 를 기질로 이용했을때 Km 과 Vm 의 값을 측정했을때 각각 0.39 % 와 268 단위 당 mg 단백질 및 0.75 mM 와 1.32 단위 당 mg 단백질로 나타났다.
