A complementary DNA plasmid library has been constructed in the plasmid pUC19, using poly (A) containing RNA isolated from the frozen rat brain tissue as the starting material. Double stranded cDNA was inserted into the Eco RI site of the plasmid using Eco RI linker, then transformed into E. coli JM83. From the resulting 1,900 colonies 26 plasmids containing cDNA copies of the brain-specific mRNA were selected by in situ colony hybridization and southern hybridization using ss cDNA probe synthesized from the liver mRNA. These cDNAs were randomly subcloned and sequenced. tight subclones were selected from the analysis of the deduced amino acid sequences carring dibasic amino acid sequence appeared intermittently. Five clones corresponding to eight subclones were isolated and partially sequenced.
쥐의 뇌에서 발현되는 새로운 호르몬을 찾고자 뇌 조직으로 부터 mRNA를 분리하여 cDNA를 만들었다. 이 cDNA는 pUC19 vector의 Eco RI site에 재조합되어 E. coli JM83 균주로 형질전환 되었으며 그 결과 얻어진 1,900개의 형질전환 균주로부터 뇌의 특이성을 갖는 것으로 추측되는 26개의 균주를 screening 하였다. 이 과정은 간 조직의 mRNA로 부터 만들어진 cDNA probe를 이용하여 in situ colony hybridization과 southern blot hybridization을 통해 수행되었다. 이들 26개의 균주가 갖고있는 외부 DNA의 염기 배열 순서를 알아내기 위해 subcloning하여 sequencing하였다. 염기 배열 순서로부터 추론된 아미노산 배열을 분석한 결과 두개의 염기성 아미노산이 연속해서 나타나는 8개의 subclone을 분리하였으며, 이들을 포함하는 5개의 clone을 부분적으로 sequencing 하였다.
