The in vitro transcription termination efficiencies of a phage T7 terminator TØ for the T7 and SP6 RNA polymerases were studied. Amounts of transcription terminated by TØ were compared with amounts of read-through transcripts run off at a restriction site. For quantitative analysis the transcripts were labeled with [a-$^{32}P$] rNTP in in vitro transcription reaction. Transcription of T7 RNA polymerase terminates with efficiency of 38% by the TØ in the pGEM3Z, but with increased efficiency in the pET-3. Interestingly, the TØ shows 81% termination efficiency for the SP6 RNA polymerase. Now this becomes the first strong terminator discovered for the SP6 RNA polymerase. This also suggests that both RNA polymerases might share a similar mechanism of transcription termination.
파아지 T7 genome 에서 가장 강력한 T7 RNA 중합효소의 전사종결제로 알려진 TØ의 전사종결효율에 대해서 연구하였다. 또한 T7 RNA중합효소와 분자생물학적 특성이 유사한 파아지 SP6 RNA 중합효소에 대한 종결능력 여부를 조사하였다. 전사종결효율을 정량적으로 측정하기 위하여 [α- P]rNTP를 사용하여 생체외 전사반응을 통해 전사체에 방사능을 부여하였다. 그리고 종결제 아랫부분을 제한효소로 절단하여 전사시킴으써 얻어지는 run-off 전사체의 양과 종결제에 의해 종결된 전사체의 양을 비교하였다. T7 RNA 중합효소의 전사는 pGEM3Z에 삽입된 TØ에 의해서는 38% 밖에 종결되지 않은 반면, pET-3에 삽입된 TØ에 의해서는 보다 높은 효율을 나타냈다. 이는 종결제 이외의 DNA 염기열이 전사종결에 영향을 미치는 것을 시사한다. 또한, SP6 RNA 중합효소의 전사도 pGEM3Z에 삽입된 TØ에 의해서 81%가 종결되었다. 이는 두 파아지 중합효소의 종결기작이 유사함을 시사한다.
