The purified genomic DNA from $\underline{Bacillus}$ $\underline{natto}$ was digested with PstI and eluted by electrophoresis to 2 fractions according to the size. Fraction 1, 2 corresponding 4-20kb, 2-4kb were ligated with a vehicle, pUC9 which was digested with PstI and dephosphorylated with CIP. The ligated DNA was transformed into competent $\underline{Escherichia}$ $\underline{coli}$ JM83 cells. Around 10,000 colonies were appeared on the selective media containing ampicillin. These transformed colonies were tested which hybridized to the probe. The No. FII-2504 colony showed positive spot. The insert size of the plasmid carrying the protease gene was 2.2kb and designated as pSEl.
The restriction maps of pSEl was constructed by digesting with Pstl, ScaI, EcoRI, HindIII, respectively. The cell harbouring pSEl showed 1.3-fold high protease activity than control $\underline{Escherichia}$ $\underline{coli}$ JM83.
$\underline{Bacillus}$ $\underline{natto}$라는 균주는 boiled soybean의 발효에 의해서 만들어지는 일본된장으로부터 isolate되었다. 현재 이 균주는 $\underline{Bacillus}$ $\underline{subtilis}$ 로 분류 되지만 $\underline{B.}$ $\underline{natto}$ 의 프로테아제 는 cloning 되지도 않았고 identification 도 되지 않았다. 그래서 우리는 $\underline{B.}$ $\underline{natto}$로부터 프로테아제 유전자를 클로닝 하여 다른 서브틸리신 유전자와 비교해보고자 하였다. Electroeluted chromosomal DNA fragment를 PstI site에서 pUC9에 끼어넣어 E. coli 로 transformation시켰다. 하나의 transformant가 프로테아제 양성반응을 보였다. 제한효소분해 에 의해서 insert size 는 2.2kb 로 밝혀졌으며 pSEl으로 명명된 plasmid 는 E. coli 내에서 maitain됐으며 tranlated되었다. pSEl을 갖는 $\underline{E.} \underline{coli}$ cell은 control $\underline{E.} \underline{coli}$ JM83 cell 보다 1.3배 높은 프로테아제 활성도를 보였다.
