Murine monoclonal antibodies to hemocyanin of the crab, Portunus trituberculatus was derived from somatic cell fusion between Balb/c immune splenocytes and myeloma. Six hybridoma lines were selected and cloned, each of them sectrets IgG 1 and exhibits titres around those of 500-1,000 fold diluted antisera. One of six monoclonal antibodies were extensively characterized and used for studying cognate antigen. Immunochemical relationship with arthropodan hemocyanin and effect on pseudo-peroxidatic activity were studied with conventional antiserum and monoclonal antibody.
Six monoclonal antibodies were shown to be inhibitory in peroxidatic reaction of Portunus hemocyanin, anti-Portunus hemocyanin monoclonal antibody (POTE53) and serum was cross-reactive with keyhole limpet hemoyanin in competititive radioimmune assay whereas antisera of Portunus hemocyanin and keyhole limpet hemocyanin were not cross-reactive in double immunodiffusion.
갑각류 중 게의 일종인 Portunus trituberculatus 의 산소 운반 단백질인 hemocyanin은 in vivo와 in vitro에서의 4차 구조가 다양하고, 연체류의 hemocyanin과는 다른 분자 구조를 가지지만 기능적 공통성 때문에 활성 부위를 포함한 일부 구조의 미세한 유사성이 제기되어 왔다. 또한, catalase, perOxidase등 생체 내의 의의가 알려지지 않은 효소활성을 가지고 있다.
이에, Portunus trituberculatus hemocyanin (PTH)에 대한 단일 클론 항체를 Balb/c 생쥐 계에서 생성하여 그 특성을 밝히고, PTH의 활성 저해 여부와, 연체류인 keyhole limpet의 hemocyanin과의 면역학적 교차반응을 조사하였다.
생성된 6개의 단일 클론 항체는 모두 Ig G1이었고, 과산화수소 존재 하에서 PTH에 의한 o-phenylenediamine의 산화를 억제하였다. 이중 한 단일 클론항체인 POTE53은 PTH의 검출에 있어 항 혈청에 의한 검출보다 16배 가량 민감하였다 . 또, POTE53과 항 PTH 혈청은 경쟁적 방사능 면역 검출법에서 keyhole limpet hemocyanin과 교차반응을 나타내었다. 이는, 연체류와 갑각류의 hemocyanin이 공통 항원 인식부위를 가짐을 보여 주며, 이 부위는 적어도 PTH에 있어서 활성에 중요함을 암시한다.
