The bacterial protein streptokinase functions in the species-specific conversion of human plasminogen to plasmin. The activation of plasminogen by streptokinase occurs indirectly via a plasmiogen activator complex.
All of the assays of streptokinase activity detected the presence of streptokinase indirectly through its capacity to activate plasminogen to plasmin. The assays conditions were established using CLN as a substrate for plasmin.
Recently a streptokinase gene from Streptococcus equisimilis was cloned and expressed in E. coli. For the comparative studies of two kinds of streptokinase produced by the transformant and Streptococcus equisimilis, they were purified by isoelectric precipitation, ethanol precipitation, DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography.
Streptokinase-like protein isolated from the transformant showed no detectable amount of enzymatic activity. Only when it was incubated with human plasminogen, casein hydrolytic and CLN esterolytic activities developed.
In studies on the effect of heat on streptokinase-like protein, the capacity of streptokinase-like protein to hydrolyze CLN was appreciably decreased only upon long exposure to temperatures of 75-95 C.
With the concentration of human plasminogen fixed at a constant value, the amount of CLN esterolytic activity inhibited by soybean trypsin inhibitor was decreased with increasing streptokinase-like protein concentration. At high streptokinase-like protein levels, the inhibitable CLN esterolytic activity fell to near zero.
The CLN esterolytic activity of some component which was generated by activating human plasminogen with catalytic levels of streptokinase-like protein was competitively inhibited by -amino caproic acid.
Also with streptokinase produced by streptococcus equisimilis the same results were obtained.
스트렙토카이네이즈는 그 자체로는 아무런 활성을 갖지 않고 단백질로서 인체 플라즈미노젠과 복합체를 형성함 으로써만 전구 효소인 플라즈미노젠을 플라즈민으로 바꾼다고 알려져 왔다.
본 연구의 목적은 스트렙토카이네이즈의 유전자를 갖고 있다고 생각되는 형질 전환된 대장균으로 부터 스트렙토카이네이즈와 유사한 단백질을 분리하여 Streptococcus equisimilis 가 내는 streptokinase 와 그 특성을 비교하는 것이었다.
정제 과정에서 스트렙토카이네이즈는 그것에 의해 생성되는 플라즈민이 Nα-Cbz-L-Lysine p-nitrophenyl ester 에 대한 가수분해 활성도를 이용하여 정량했다. 정제는 isoelectric precipitation, ethanol precipitation, DEAE-Sephadex A-50 column 을 사용하여 했다.
대장균에서 분리한 단백질이 인체 플라즈미노젠을 플라즈민으로 전환시킬 수 있는지의 여부는 인체 플라즈미노젠과 분리한 단백질을 장시간 반응시킨 후 반응 용액내에 CLN 과 casein 에 대해 활성을 보이는 물질의 존재를 확인하여 간접적으로 알아왔다.
대장균에서 분리한 단백질은 플라즈미노젠이 있을 경우에만 CLN 과 casein 에 대해 활성을 나타냈으며 열에 의한 불활성화에는 강한 저항성을 보였다.
그리고 인체 플라즈미노젠과 대장균에서 분리한 단백질을 반응 시키면 반응용액 내에 STI와 ε-ACP 에 의해 활성이 저해받는 물질이 형성 됐으며 STI 를 사용한 실험에서는 분리한 단백질의 농도가 커질수록 저해받는 정도가 낮아짐을 알 수 있었다. Streptococcus equisimilis 가 내는 streptokinase 를 가지고도 위에서와 똑같은 결과를 얻었다. 이상의 결과로 부터 대장균에서 분리한 단백질은 스트렙토카이네이즈임을 확실히 알 수 있었다.
