TypeII restriction and modification enzymes are ideal model systems for studying the specific DNA-protein interaction because of their small size, simple catalytic requirements for activity and recognition sequence specificity. A new restriction endonuclease, XciI, has been partially purified from $\underline{Xanthomonas} \underline{citri}$ IFO 3835, its catalytic properties and recognition sequence have been identified. This enzyme XciI cleaves bacteriophage λ DNA at two sites, pUC9 and pBR322 plasmid DNA at one site, but it cleaves neither ØX174 DNA nor SV40 DNA. The enzyme shows maximum activity at pH values between 7.5 and 9.0, and in the presence of 20 mM $MgCl_2$. The addition of large amounts of Sodium Chloride (>100mM) causes a decrease in XciI activity. Temperature for optimum endonuclease activity is 37℃. But, Bovine Serum Albumin and sulfhydryl compounds have no influences on XciI restriction endonuclease activity.
This restriction endonuclease XciI recognizes the sequence
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5'-GTCGAC-3'
3'-CAGCTG-5'
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and cuts at the sites indicated by the arrows, identical with that cleaved by endonuclease SaII (of $\underline{Streptomyces} \underline{albus}$ G).
Type II 제한 효소와 변형 효소는 크기가 작고, 작용 기작이 간단하고, 특이한 염기 서열을 인식하기 때문에 DNA 와 단백질과의 상호작용을 연구하는 이상적인 모델로 이용되어 왔다. 우리는 이러한 DNA 와 단백질 과의 상호작용 연구에 역점을 두며 그 연구의 일면으로 새로운 Xci I endonuclease 를 분리하고, 이것의 catalytic properties와 인식부위의 염기 서열에 대해 분석하였다.
새로운 Xci I restriction endonuclease는 $\underline{Xanthomonas} \underline{citri}$ IFO 3835 cell 100 g 에서 $(NH_4)_2SO_4$ 분획 침전, heparinagarose, DEAE-Sephadex (A-50), phosphocellulose (P-ll), 그리고 hydroxylapatite column 을 통과하여 부분적으로 분리하였다. 이렇게 분리된 Xci I 제한 효소는 박테리오 파아지 λ DNA 에 2개, pUC 9 과 pBR 322 플라스미드 DNA에 1개의 절단 부위를 가지고 있다. 그러나 이 제한 효소는 ØX174 DNA 와 SV40 DNA는 자르지 못 하였다.
그리고 Xci I 제한효소 활성에 미치는 여러가지 인자의 최적 조건은 다음과 같다 : 50 mM Tris/HCl, pH 7.5, 20 mM $MgCl_2$, 50 mM NaCl, and 37℃.
Xci I 제한 효소의 인식 부위의 염기 서열을 분석한 결과, 이 Xci I 제한 효소는 다음과 같은 염기 서열을 인식하고 화살표 가
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5'-GTCGAC-3'
3'-CAGCTG-5'
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가르키는 곳을 자른다. 이러한 인식 절단 부위는 Sal I 제한효소 (of $\underline{Streptomyces} \underline{albus}$ G) 의 그것과 같음 으로써 Xci I 제한효소는 Sal I 제한 효소와 isoschizomer 임을 밝혀냈다.
