α-Lactalbumin binding to large-volume vesicles are investigated by a technique based on the separation by centrifugation of phospholipid-bound protein from the bulk solution. Large-volume vesicles are prepared by using the ether injection method and they appeared to be unilamellar judging from their electron micrograms.
Interaction of α-lactalbumin with the vesicles are carried out in 10mM TRIS buffer solution (pH 7.0) at various NaCl concentrations. The experimental temperature is maintained at 4C. The results show that α-lactalbumin binds only to vesicles containing stearylamine, and that the vesicle seems to have a limited number of independent binding sites. The dissociation constants are calculated from the double-reciprocal plots of concentrations of bound and free proteins. The results also show that the dissociation constants increase with increasing ionic strength, and with decreasing stearylamine content in the vesicles. This result suggests that the interaction between α-lactalbumin and phospholipid vesicles is primarily electrostatic in nature.
Mammary glands 에서 lactose 합성에 관여하는 α-lactalbumin은 단백질과 인지질 막의 상호관계를 연구하는데 이용할수 있다. 중성 pH 에서 α-lactalbumin 은 전기적 결합으로 인지질 막의 표면에 부착 한다. 양성 전기를 띄고 있는 인지질 막과 α-lactalbumin 을 반응 시키면, 결합곡선은 hyperbolic 한 모양을 나타낸다. 이로써 이러한 인지질 막은 cooperativity 가 없는 독립적인 반응 부위를 가지고 있으며, 모든 반응 부위가 동일한 값의 해리 상수를 보인다는 것을 알수있다. α-lactalbumin 의 인지질 막에 대한 반응 친화성과 최대 결합 능력은 인지질 막에 stearylamine 의 양이 증가할수록 커진다. 그러므로 vesicle 의 α-lactalbumin 에 대한 결합부위는 양성 전하를 띄고 있는 stearylamine 이며, 최대 결합한 상태에서, 인지질 막대 α-lactalbumin의 mole ratio 값으로 미루어 보아 α-lactalbumin 은 전체 부위가 아닌 일부 부위만을 통해 인지질 막에 결합한다는 것을 보여준다.
또한 이온 결합에서 기대되듯이, α-lactalbumin 과 인지질 막의 반응에 서의 해리 상수는 이온 강도가 증가함에 따라 커진다.
