Chromosomal DNA was isolated from $\underline{Bacillus}$ $\underline{megaterium}$ and plasmid pUB110 from $\underline{Bacillus}$ $\underline{subtilis}$ BD630. The chromosomal DNA was digested with XbaI and the 1.5 to 2.5 kilo-base fragments were isolated with DEAE paper and ligated to the plasmid pUB110 digested with XbaI and dephosphorylated with bacterial alkaline phosphatase.
Competent Bacillus subtilis cells were prepared by treatment with 50 mM $CaCl_2$ solution and were transformed with the hybrid plasmids. And the kanamycin resistence transformants were screened for the production of beta-amylase.
Among the 2,000 transformant colonies the 910th colony produced high amount of beta -amylase. The recombinant plasmid pBMA910 harbouring cell showed amylase activity about 250-fold higher than that of the transformation recipient cell $\underline{Bacillus}$ $\underline{subtilis}$ BD170.
The fact that this enzyme is excreted so much shows me the possibility to use the plasmid pBMA910 as a new cloning vector for secretion of foreign gene products.
$\underline{Bacillus}$ $\underline{megaterium}$ 의 chromosome 을 분리하여 제한효소 Xba I으로 절단한 뒤 전기영동장치를 이용하여 1,500 - 2,500의 염기쌍을 갖는 DNA 를 DEAE paper 로 분리해 냈다. 이들을 Xba I 으로 절단한 플라스미드 pUB 110 에 연결시켜 $\underline{Bacillus}$ $\underline{subtilis}$ BD 170 세포 속으로 주입한 뒤 재조합 유전자의 발현을 관찰하였다.
재조합 플라스미드로 형질변환이 된 콜로니를 2,000여개 얻어서 이들 중 베타아밀라제 유전자가 재조합 된 것으로 보이는 콜로니를 감별하여 연구 실험한 결과 이 콜로니는 유전자 운반체인 플라스미드 pUB 110에 약 2,000여개의 염기쌍을 갖는 DNA 가 연결된 재조합 플라스미드 pBMA 910을 갖는 것으로 밝혀졌다.
이와같이 pBMA 910 으로 형질변환 된 세포는 유전자 운반체인 pUB 110을 지닌 세포의 특성을 지니고 있으면서 아밀라제의 활성도는 대단히 커서 아밀라제 유전자의 근원인 $\underline{Bacillus}$ $\underline{megaterium}$ 이나 형질변환 대상으로 쓰인 $\underline{Bacillus}$ $\underline{subtilis}$ BD 170 에 비해 약 250배의 아밀라제 활성도를 나타내는 것으로 밝혀졌다.
아밀라제 유전자가 세포 속에서 최대한 50여개로 늘어난다고 가정해도 250배의 아밀라제 활성도를 나타낸다는 것은 재조합 된 아밀라제 유전자의 promotor 에 의한 영향을 받는 것이라는 가정을 세울 수 있고 이 promotor 는 유전자 운반체의 promotor 에 비해 훨씬 강력할 것이라는 것이 실험자의 추측이다.
이 균주는 연구실험을 더하여 아밀라제 생산공업에 응용할 수 있을 것이고 또한 재조합 플라스미드의 베타아밀라제 구조 유전자를 떼어 버리고 promotor 만 남겨 그 뒤에 다른 유전자를 재조합하여 발현시키는 새로운 유전자 운반체로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
