Plasmid pUB110 which was originated from $\underline{Staphylococcus aureus}$ and has been known to be expressed and maintained in $\underline{Bacillus subtilis}$ was tried to transfer into protoplasts of $\underline{B}$. $\underline{cereus}$ for the purpose of confirming possibility of utilizing the plasmid as a shuttle vector between the two species.
About 60% of transformation was obtained by adjusting the amount of plasmid DNA to be used as 1g and the time for PEG treatment as 2 minutes. About 90 minutes of incubation was needed before transferred to the regeneration medium for the transformed protoplasts to regenerate with highest efficiency on the regeneration medium.
The presence of recombination and restriction-modification system in $\underline{B}$. $\underline{subtilis}$ host cells did not affect on the acceptance of the plasmid DNA into the protoplasts.
Fresh cells of $\underline{B}$. $\underline{cereus}$ grown in B-broth were harvested at the late log phase and protoplasted. The naked protoplasts were then transformed with pUB110 plasmid DNA.
The successful transformation was confirmed by observing plasmid DNA band in the electrophoresis patterns of the transformant cell lysates.
Further confirmation was made by the kanamycin resistance in the transformed B. cereus cells which had been sensitive to the antibiotic before transformed.
본 실험에서는, pUB 110 플라스미드를 나세포( Protoplast ) 상태의 고초균에 집어넣어 유전형질을 전환시키는 연구를 수행하였다. 이러한 유전형질 전환과정중, recombination 및 제한-변형 체계가 원래 세포의 형질 전환과정 및 수율에 영향을 미치는가를 살펴보기 위하여 여러종류의 특이형질을 가진 $\underline{B subtilis}$ 를 사용하여 실험하였으며, 그결과 이러한 체계는 형질 전환과정에 거의 영향을 끼치지 않는것이 밝혀졌다.
나세포 형질전환에 관련된 여러 인자들을 고찰하여 적정조건을 찾아보았는데, 첫째, 들어가는 플라스미드 DNA의 양은 1㎍이 적당하며 둘째, PEG 처리시간은 2분간이 좋고 셋째, 재생배지에 옮기기전에 90 분간 37℃ 에서 배양한후 옮기는 것이 높은 형질전환 수율을 나타내는데 있어 필요하다는 것을 알수 있었다.
$\underline{B cereus}$ 의 나세포 형질전환을 수행한바 종래의 방법으로는 플라스미드에 의해 형질전환 되지 않던 $\underline{B cereus}$ 가 나세포 형질전환방법에 의해 형질전환 되었으며, 그것의 수율은 말기지수 상태에 있는 균을 사용하였을때 최대로 되었다.
형질전환된 고초균들의 MIC 값을 조사했을때 이들의 값은 균종에 관계없이 카나마이신 40㎍/ml 을 나타내었다.
