Procarcinogen induced DNA single-strand breaks and unscheduled DNA synthesis were measured in primary rat hepatocytes culture. For single-strand breaks assay, rat liver DNA was prelabeled by injecting $^3H$-thymidine during the peak of DNA synthesis following partial hepatectomy. Hepatocytes were isolated from the rat 2 weeks after surgery by collagenase perfusion technique and maintained in the hormonal medium AB. DNA single-strand breaks were measured by the alkaline elution technique. Aflatoxin $B_1$, 2-acetylaminofluorene and diethylnitrosamin made dose- and time- related increases in the number of single-strand breaks.
Unscheduled DNA synthesis was measured on the basis of incorporation of $^3H$-thymidine into DNA for carcinogen treated hepatocytes. DNA was purified by treating the cells with SDS-EDTA-glycine solution and proteinase K on 2 um pore size PVC filter. Aflatoxin $B_1$, 2-acetyl-aminofluorene and diethylnitrosamine also showed a dose-dependent unscheduled DNA synthesis response.
These results showed a good correlation between two methods and alkaline elution was slightly more sensitive than was unscheduled DNA synthesis.
현재 수 많은 발암물질 조사 방법이 알려져 있다. 본 실험에서는 물질 대사 능력이 있는 일차 배양 간세포 에서 표준 발암 물질인 aflatoxin $B_1$, diethylnitrosamine, 2-acetylaminofluorene을 처리하여 생성되는 DNA 손상과 그 복구를 측정하여 발암성 물질 조사에 유용한가와 DNA 손상과 그 복구를 측정하는 방법의 감도를 비교하였다. DNA 손상을 측정하기 위해 먼저 백쥐의 간을 일부 절단한뒤 $^3H$-thymidine 으로 DNA 를 labeling 한뒤 알칼리 유출법으로 손상 정도를 측정하였다. Aflatoxin $B_1$, diethylnitrosamine 그리고 2-acetylaminofluorene 모두 DNA 단사 절단을 유도 하였고, 또한 비 주기성 DNA 합성도 야기 시켰다. DNA 단사 절단과 복구 정도는 처리한 발암물질의 dose 에 따라 현저히 증가 하였으며 또한 처리 시간에 따라서도 그 정도가 증가하였다. 알칼리 유출법에 의한 DNA단사 절단을 측정하는 것이 비 주기성 DNA 합성을 측정하는 것 보다 발암물질 검출에 있어서 감도가 높은 것으로 나타났다.
