Trials of increasing cell concentration together with addition of protective agents have been practiced to prevent the cell viability loss occurring during freezing or lyophilization of lactic starter cultures.
When $\underline{Lactobacillus}$ $\underline{bulgaricus}$ was cultured in reconstituted 11% non-fat dry milk at 45℃, the maximum cell concentration obtained was $2.2×10^6$ cells per ml and only 33% of them could survive through freezing and 26% through lyophilization. The maximum cell concentration could be increased to $9.1×10^8$ cells per ml when the organism was agitated in tryptone broth for 18 hours at 38℃ under the constant level of pH 6.5. The cell concentration was further increased to $2.9×10^9$ cells per ml by centrifuging the cultured broth. When the concentrated cell suspension was subjected to freezing, or lyophilization, 55%, or 51% of the original cells were found to be survived respectively.
The survival rate against the freezing could be further raised to 62% by adding glycerol at the level of 10% to the cell suspension, and to 79% against lyophilization when the G.C.G .S. suspending medium composed of 5% gelatin, 5% sodium citrate, 2% M. S.G. and 10% sucrose was added to the cell suspension.
Yogurt 제조에 관여하는 균주인$\underline{Lactobacillus}$ $\underline{bulgaricus}$를 사용한 凍結 및 凍結乾燥 乳酸菌 starter 제조과정 중 나타나는 生存度의 저하를 방지하기 위해 乳酸菌의 濃度를 높여주었다. 우선 培養過程에서 最大微生物濃度를 얻고자 乳酸菌 培養時 일반적으로 사용하는 11% NFM 배지 대신 Tryptone 반합성배지를 사용하여 배양온도 및 통기, 교반, pH조절, 수확시기등을 결정하였다.
Tryptone 배지에서의 $\underline{L.}$ $\underline{bulgaricus}$의 최적온도는 38℃였으며, 200 rpm으로 교반하면서 20% NaOH용액을 사용하여 배양도중 생성되는 유산으로 인해 저하되는 PH를 6.5로 고정시킴으로써 11% NFM 배지에서의 일반적 배양법에 의해 얻을 수 있는 乳酸菌 농도의 약 1,800배를 얻을 수 있었다. 그러나 乳酸菌 增殖에 미치는 통기의 影響은 뚜렷하지 않았다.
또한 最適條件으로 培養한 乳酸菌을 대수기 말기에 수확하여 원심분리법에 의해 더욱 농축시킬 수 있었고 이를 凍結 및 凍結乾燥시킨 결과 $\underline{L.}$ $\underline{bulgaricus}$의 生存度가 각각 33%, 26%에서 55%, 51%로 증가하였다.
한편 抗凍結劑로서 glycerol 및 G.C.G.S. 현탁용액을 첨가시켜 이들이 $\underline{L.}$ $\underline{bulgaricus}$의 生存度 및 活性度 유지 현저한 보호효과를 나타냄을 확인하였다.
