For structural analysis of the phage T7 RNA polymerase, the phagemid pKU 01 carrying plasmids the T7 RNA polymerase gene under the control of lac promoter was constructed from pAR1219 and pUC119. Using recently developed, efficient random mutagenesis method of Xiube Liao, the C-terminal region of the T7 RNA polymerase was mutagenized. For a more efficient mutagenesis, a higher concentration of misincorporating nucleotide and longer misincorporation reaction time. As results a library of E. coli colonies containing mutations in the T7 RNA polymerase gene was constructed. Occurrance of mutations was suggested by the fact that colonies were formed when the mutated plasmids were inserted in E. coli BL21(DCAT4), which would not grow with wild-type T7 RNA polymerase gene.
파아지 T7 RNA 중합 효소의 여러가지 작용에 관여하는, 단백질의 부위를 결정하기 위한, 단백질 공학적 돌연변이 유도 실험을 수행하기 위하여, 발현용 벡터인 pKU01을 제조하였다. 최근에 개발된 아주 효과적인, 부위 특이적 돌연변이 유도 방법을 이용하여 T7 중합 효소의 C-말단 부위를 우선적으로 돌연변이 반응시켰다. 야생형 RNA 중합 효소 유전자를 함유하는 살지 못하는 E.coli BL21(DCAT4)에 반응된 플라스미드를 도입 시킨 결과, 살아나는 균주가 있음으로써 T7 RNA 중합 효소 유전자에 돌연변이가 발생했음을 알 수 있었다.
