The induction of cytochrome P-450 by 2-acetylaminofluorene, a potent hepatocarcinogen, was studied in primary cultures of adult rat hepatocytes. Addition of 2-acetylaminofluorene to the hepatocyte cultures induced the P-450IA1-specific ethoxyresorufin O-deethylase activity in dose- and time-dependent manner. The P-450IIB-specific pentoxyresorufin O-dealkylase activity was also induced, though to an even lesser degree, at high concentration of 2-acetylaminofluorene. To elucidate the mechanism of the induction of ethoxyresorufin O-deethylase activity by 2-acetylaminofluorene, we performed Northern blot analysis using a specific oligonucleotide probe recognizing P-450IA 1/2 mRNA and found that the induction is not mediated by the accumulation of the specific mRNA. The result of experiment using cycloheximide, an inhibitor of protein biosynthesis, in which 0.5μM cycloheximide completely blocked the induction of P-450IA1-specific ethoxyresorufin O-deethylase activity indicated that protein biosynthesis is required for the induction in response to 2-acetylaminofluorene and this was supported by the enzyme-linked immunosorbent assay showing actual increase in P-450IA1 protein.
본 연구에서는 일차배양 간세포에서 강력한 간암 발암원인 2-acetylaminofluorene (2-AAF)에 의한 cytochrome P-450의 유도와 그 기작에 관해 살펴 보았다. P-450IA1에 특이적인 ethoxyresorufin 0-deethylase(EROD)의 활성은 2-AAF의 농도와, 배양시간에 의존하는 양태로 유도되었으며, P-450IIB에 특이적인 pentoxyresorufin 0-dealkylase 의 활성은 높은 농도의 2-AAF에 의해 약간 증가하는 양상을 보였다. 2-AAF에 의한 EROD 활성의 증가는 P-450IA1/2 단백질의 증가를 수반했다. EROD 활성 유도의 기작을 알아보기 위해 Northern blot 분석을 수행 하였는데, 2-AAF 처리군에서 P-450IA1/2 mRNA의 증가는 보이지 않았다. 그런데 강력한 단백질합성 저해제인 cycloheximide를 2-AAF 처리군에 가했을때 EROD 활성의 유도가 완전히 억제되는 것으로 보아, 일차배양 간세포에서 2-AAF에 의한 EROD 활성의 유도는 mRNA의 축적에 의해서가 아니라, 단백질 생합성에 의해 매개되는 것으로 여겨진다.
