Analysis of CAT plasmids containing BPV-1 (Bovine Papillomavirus Type-1) P3 promoter allowed identification of the promoter activity and E2 transactivator required for maximal transcription of the P3. The results showed that the P3 is very weak promoter and E2 transactivator requires for the maximal transcription of P3 promoter in a BPV-1 URR (Upstream Regulatory Region) dependent manner. It is suggested that an autoregulatory circuit based on the E2 protein is crucial. Furthermore, we removed portions of the 5' or 3' flanking sequence of P3 promoter using an exonuclease BAL 31 and characterized the transcriptional activity of the resulting deletion CAT mutants. This analysis showed that an upstream sequence, delimited by -320 (nt 576) bp and -94 (nt 802) bp with respect to the mRNA cap site, is required for the functional activity of P3 promoter. In contrast, very low levels of transcription were directed by constructs that contained 162 bp (-94 to +1 bp ) of 5' non-coding sequence, suggesting that the additional sequence ( -302 to -94 ) further 5'exert a quantitative effect on transcription. Within this 226 bp region of P3 promoter, there are several sequence motifs, $ACCN_6GGT$, SV40 enhancer core sequence and ATF binding site, highly analogous to the consensus sequence of binding sites for transcriptional regulatory proteins.
BPV-1 P3 프로모터의 활성도와 E2 transactivator가 P3 프로모터의 발현에 중요하다는 것을 밝히기 위하여 여러 가지 CAT plasmid constructs을 만든 후 CAT 분석법으로 조사하였다. 그 결과 P3 프로모터는 매우 약한 CAT 활성도를 보였으나 BPV-1 URR, SV40 enhancer 등이 P3 프로모터와 연결되었을 때 E2 transactivator에 의해 CAT 활성도가 현격히 증가하였다. 그러므로 P3 프로모터 역시 BPV-1 URR과 연관되어 조절된다는 사실과 P3 프로모터에서 이러한 E2 단백질이 전사되는 사실로 보아 P3 프로모터의 전사조절은 E2 단백질에 의해 autoregulation 되어 진다는 것을 알 수 있다. 또한, 본 연구에서는 exonuclease BAL 31을 사용하여 P3 프로모터의 5' 과 3' 측면 각각의 염기서열들을 차례로 잘라내어 얻어진 CAT plasmid mutants 들의 CAT 활성도를 비교하였다. 그 결과 mRNA 전사 시작위치와 비교할 때 -320 bp (nt 576) 에서 -94 bp (nt 802)까지의 약 226 bp가 P3 프로모터의 활성에 중요한 부위로 나타났다. 그러나, -94 bp (nt 802)에서 +1 bp (nt 896)의 162 bp 부위는 P3 프로모터의 전사에 별다른 영향을 주지 않았다. 이러한 P3 프로모터의 5' 226 bp 부위의 non-coding sequence를 살펴보면 $ACCN_6GGT$ motifs, SV40 enhancer core sequences, ATF binding motif등 전사조절 단백질의 결합부위와 유사한 염기서열들이 발견되었다.
