Fas belongs to Tumor Necrosis Factor Receptor Super family and exists on the cell surface. Fas possesses Death Domains, and these domains recruit Fas-associated Death Domain (FADD) and Caspase-8, which form Death-Inducing Signal Complxes (DISC) and ultimately induce apoptosis. However, Fas adopts another pathway to induce apoptosis, which is mediated by Daxx. Daxx proteins have been known for linking Fas to Jun N-terminal Kinase (JNK). Daxx primarily resides in the nucleus. However, certain stimuli relocate Daxx to cytoplasm, where Daxx plays the mediator role for conveying apoptosis signal from Fas to JNK. Yeast two hybrid screen detected Speckle-type POZ-domain protein (SPOP) bound Daxx, and Glutathione S-transferase (GST) pull down and Western Blotting showed SPOP bound Daxx in 293 cells. Binding assays of SPOP and Daxx mutants concluded that SPOP bound Daxx at Daxx C-terminal and that Daxx interacted with SPOP at SPOP N-terminal. Anti-Fas stimuli specifically enhanced apoptosis in 293 cells overexpressing Daxx. This study investigates whether and how SPOP affects Daxx function. Despite the onset of Fas-mediated apoptosis by anti-Fas, SPOP overexpression abolishes Daxx contribution to apoptosis. Furthermore, overexpression of SPOP mutants with anti-Fas treatment suggests that SPOP C-terminus is involved in the proapoptotic function of Daxx.
Fas는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리에 속하고 세포 표면에 존재한다. Fas는 사멸 도메인(Death Domain)을 가지고 있고, 이 도메인들이 사멸 유발 신호 콤플렉스(DISC)를 형성하는 Fas 관련 사멸 도메인(FADD)와 케스페이즈-8를 모으고 궁극적으로 세포예정사를 유발한다. 그러나, Fas는 또 다른 패쓰웨이를 거쳐서 세포예정사를 유발하는 데, 여기에 Daxx 단백질이 신호를 매개한다. Daxx 단백질이 Fas를 Jun N 말단 카이네이즈(JNK)로 연결 시키는 것으로 잘 알려져 왔다. Daxx는 주로 핵 내에 존재한다. 그러나, 어떤 자극에 의해 Daxx는 세포질로 이동하게 되고, 세포질에서 Daxx는 Fas에서 JNK로 연결되는 세포예정사 신호를 매개하는 역할을 수행한다. 이스트 투 하이브리드 스크린을 통해 Speckle-type POZ-도메인 단백질(SPOP)이 Daxx 단백질과 결합하는 것을 발견했고, Glutathione S-transferase (GST) pull down과 웨스턴 블랏팅으로 SPOP이 293 세포 내에서도 Daxx에 결합하는 것을 확인했다. SPOP과 Daxx mutant들을 이용한 결합 조사에서 SPOP은 Daxx의 C 말단에 결합하는 것을 보였고, Daxx는 SPOP의 N 말단에서 결합하는 것을 확인했다. Daxx 단백질을 과발현하는 293세포에서 anti-Fas 자극은 특이적으로 세포예정사를 증가시켰다. 본 논문은 SPOP이 Daxx의 기능에 영향을 주는 지 그리고 어떻게 주는 지를 탐구했다. anti-Fas를 통한 Fas 매개 세포예정사의 촉발에도 불구하고, SPOP 과발현은 Daxx에 의한 세포예정사를 감소시켰다. 게다가, anit-Fas 처리를 하고 SPOP mutant들을 과발현 했을 때 SPOP의 C 말단이 Daxx 단백질의 pro-apoptotic 기능 억제에 관련 있음을 시사 했다.
