Interleukin-8 (IL-8), a neutrophil chemoattractant, is a potent proinflammatory cytokine. This study showed that radicicol, an anti-fungal antibiotic, inhibited IL-8 gene expression, and IL-8 gene expression is mediated through activated mitogen-activated protein (MAP) kinase pathways. Radicicol suppressed IL-8 gene expression in PMA/LPS-stimulated THP-1 human monocyte cell line. The PD98059 and SB203580, known as a specific inhibitor of ERK and p38 kinase respectively, were used to find which pathway is more important for IL-8 gene expression. The RT-PCR data showed that radicicol and PD98059 inhibited IL-8 gene expression. SB203580 did not inhibit IL-8 gene expression as effectively as PD98059. NF-kB and AP-1 are critical transcription factors for IL-8 mRNA transcription, and their DNA bindings are also inhibited by radicicol, PD98059 and SB20350 as shown by gel retardation study. The other transcription factors, NF-IL6 and Octamer DNA binding activites were not affected by radicicol. In Western blot analysis revealed that phosphorylation of ERK1 was attenuated by radicicol. Radicicol showed weak inhibitory effect on phosphorylation of ERK2 and p38 MAP kinase. This study proposes that radicicol inhibits IL-8 gene expression in human monocytes.
Interleukin-8(IL-8)은 다양한 종류의 세포에서 생성되며 면역세포들을 끌어모아 염증 반응을 일으키는 cytokine이다. 본 실험에서는 mitogen-activated protein (MAP) kinases의 억제 효과가 있는 radicicol이, 사람의 monocyte cell line인 THP-1세포에서 생성되는 IL-8의 유전자 발현에 미치는 영향에 대해 연구하였다. Competitive RT-PCR 을 이용하여 유전자 발현에 미치는 영향을 알아본 결과, PMA/LPS의 존재하에 Radicicol이 THP-1 cell에서 IL-8의 gene expression을 억제하였다.
Radicicol의 억제기작을 알아보기 위해 수행한 electrophoretic mobility shift assay에서, IL-8의 중요한 전사 조절 단백질인 AP-1과 NF-κB의 DNA binding이 radicicol에 의해 억제됨을 관찰하였다. 또 다른 전사 조절 단백질인 NF-IL6와 Octamer의 DNA binding은 radicicol의 영향을 받지 않았다. Western blot을 수행한 결과, 세포 내 중요한 신호 전달 체계인 ERK와 p38 MAP kinase의 phosphorylation이 radicicol에 의해 억제되었다. ERK와 p38 MAP kinase에 특이성을 갖는 억제제들을 사용하였을 때에도 IL-8의 유전자 발현, 전사 조절 인자의 활성이 억제 되었다. 즉, PMA와 LPS에 의해 활성화된 THP-1세포에서 IL-8의 유전자 발현에 필요한 AP-1, NF-ĸB전사 조절 인자의 활성이 radicicol에 의해 억제되었고, 이는 ERK, p38 MAP kinases경로를 경유함을 알 수 있었다. 또한, radicicol이 IL-8을 억제함으로써 염증 반응을 억제할 수 있는 물질로서의 능력을 갖고 있음을 제시하였다.
